宿主波形蛋白在禽网状内皮组织增生病病毒感染中的作用机制研究

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 网状内皮组织增生病病毒

1．1．1 病原学

1．1．2 流行病学

1．1．3 临床症状与病理变化

1．1．4 免疫抑制

1．1．5 鉴别诊断

1．1．6 防治

1．2 宿主波形蛋白(vimentin)研究进展

1．2．1 Vimentin蛋白分子结构

1．2．2 Vimentin蛋白的分子生物学功能

1．2．3 Vimentin与病毒相互作用研究进展

1．3 本研究的目的和意义

第二章 REV感染对宿主波形蛋白表达的影响

2．1 材料和方法

2．1．1 病毒、细胞、抗体、质粒和试剂

2．1．2 主要仪器设备

2．1．3 引物设计与合成

2．1．4 REV复壮与鉴定

2．1．5 鸡源Vimentin基因的克隆与分析

2．1．6 Vimentin Real time PCR的建立

2．1．7 Vimentin在鸡组织中的分布检测

2．1．8 REV感染对vimentin表达的影响

2．2 结果

2．2．1 REV的复壮与鉴定

2．2．2 鸡源vimentin基因的克隆与序列分析

2．2．3 鸡源vimentin基因Real time PCR的建立

2．2．4 波形蛋白vimentin在鸡组织中的分布

2．2．5 REV感染上调vimentin的表达

2．3 讨论

第三章 宿主波形蛋白对REV复制影响的研究

3．1 材料和方法

3．1．1 病毒、细胞、抗体、试剂

3．1．2 主要仪器设备

3．1．3 引物设计与合成

3．1．4 靶向vimentin的siRNA筛选

3．1．5 Vimentin下调表达对REV复制的影响

3．1．6 Acrylamide对CEF细胞活性的影响

3．1．7 破坏vimentin的结构对REV复制的影响

3．2 结果

3．2．1 靶向vimentin的有效siRNA的筛选

3．2．2 下调vimentin的表达抑制REV复制

3．2．3 Acrylamide对CEF细胞活性的影响

3．2．4 抑制vimentin功能抑制REV的复制

3．3 讨论

第四章 宿主波形蛋白影响REV复制的机制研究

4．1 材料和方法

4．1．1 细胞、抗体、试剂

4．1．2 主要仪器设备

4．1．3 引物设计与合成

4．1．4 REV PR蛋白原核表达

4．1．5 REV PR切割活性的鉴定

4．1．6 REV PR对vimentin原核蛋白的切割活性分析

4．1．7 PR对vimemin真核蛋白的切割活性分析

4．1．8 PR对细胞中vimentin分布的影响

4．1．9 REV感染对细胞中vimemin分布的影响

4．2 结果

4．2．1 REV PR和p18-p30蛋白的原核表达及纯化

4．2．2 PR切割活性的鉴定

4．2．3 PR酶活性最佳反应条件的优化

4．2．4 PR切割vimentin原核表达蛋白

4．2．5 PR DTG基序影响切割vimentin蛋白

4．2．6 PR活性功能区域的确定

4．2．7 PR切割vimentin真核表达蛋白

4．2．8 PR蛋白影响细胞中vimemin的分布

4．2．9 REV感染影响vimemin蛋白的分布

4．3 讨论

第五章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历