亚洲棉石系亚1号耐旱相关基因cDNA文库的构建与分析

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第一章绪论

1.1亚洲棉石系亚1号简介

1.2棉花耐旱机制的研究进展

1.3棉花耐旱相关基因

1.3.1渗透调节物质脯氨酸、甜菜碱合成相关基因

1.3.2可溶性糖合成有关的基因

1.3.3 LEA蛋白

1.3.4调控耐旱基因表达和信号转导的转录因子

1.4棉花耐旱相关的基因的研究方法

1.5抑制性差减杂交(SSH)技术

1.5.1抑制性差减杂交技术的原理

1.5.2抑制性差减杂交技术的实验过程

1.5.3抑制性差减杂交技术优缺点

1.5.4抑制性差减杂交技术在棉花差异表达基因上的研究进展

1.6研究目的和意义

1.7实验路线

1.8实验方案

第二章抑制性差减杂交法构建亚洲棉石系亚1号cDNA文库

2.1材料与试剂

2.1.1材料

2.1.2化学试剂、酶及试剂盒

2.1.3主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1实验材料制备

2.2.2总RNA的提取

2.2.3 mRNA的分离纯化

2.2.4 cDNA抑制差减文库的构建

2.2.5差减cDNA文库的初步筛选

2.3实验结果

2.3.1总RNA和mRNA的检测

2.3.2双链cDNA合成结果检测

2.3.3 cDNA接头连接效率分析

2.3.4二次PCR产物分析

2.3.5 PCR分析差减效率

2.3.6菌落PCR初步筛选差减cDNA文库

2.4本章讨论

第三章反向Northem筛选阳性克隆

3.1实验材料

3.2实验试剂

3.3实验方法

3.3.1探针标记

3.3.2 cDNA点阵膜的制备

3.3.3杂交检测

3.4实验结果

3.5本章讨论

第四章生物信息学分析

4.1 cDNA文库测序

4.2 GO分类

4.3 COG分析

4.4KEGG分析

4.5本章讨论

第五章半定量RT-PCR法分析棉花耐旱相关基因的表达

5.1实验材料

5.2实验方法

5.2.1单链cDNA合成

5.2.2棉花耐旱相关基因的扩增

5.3实验结果

5.4本章讨论

第六章创新点

第七章结论

参考文献

附录

致谢

作者简历