PTD对Bt杀虫蛋白Cry1Ac的增效和克抗分子机理研究

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第一章文献综述

1.1 BT毒素的研究进展

1.1.1 Bt毒素的分类

1.1.2 Bt毒蛋白的作用机理

1.1.3 Bt基因工程

1.2昆虫对BT抗性研究进展

1.2.1昆虫对Bt抗性的发展

1.2.2昆虫对Bt的抗性机制

1.2.3 Bt受体的研究进展

1.3.蛋白转导研究进展

1.3.1蛋白转导结构域的发现

1.3.2 TAT-PTD转导机制的研究

1.3.3 PTD应用概述

1.4.昆虫杆状病毒表达系统

1.4.1杆状病毒/昆虫表达系统的发展历史

1.4.2昆虫杆状病毒表达系统的优点

1.4.3重组杆状病毒的构建

1.4.4 BEVS的应用

1.5本研究的目的和意义

第二章研究内容和技术路线

2.1研究内容

2.2技术路线

第三章融合蛋白的毒力测定

3.1材料和试剂

3.2实验方法

3.2.1融合蛋白TAT-Cry1Ac的构建

3.2.2 TAT-Cry1Ac融合基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达

3.2.3融合蛋白的生物测定

3.3结果与分析

3.3.1融合蛋白的诱导表达

3.3.2六种融合杀虫蛋白的毒力测定结果

3.4小结

第四章小菜蛾类钙粘蛋白基因的克隆及序列分析

4.1试验材料

4.2试验方法

4.2.1小菜蛾中肠RNA的提取

4.2.2反转录

4.2.3钙粘蛋白(CAD)的PCR扩增

4.2.4 PCR产物的回收纯化

4.2.5 PCR纯化产物与pEASY-T1载体的连接

4.2.6转化感受态细胞TOP 10

4.2.7质粒DNA的提取

4.2.8检测

4.2.9钙粘蛋白序列测定

4.3结果与分析

4.3.1小菜蛾中肠RNA提取

4.3.2 CAD的PCR扩增

4.3.3质粒酶切及PCR

4.3.4核酸序列结果与分析

4.4小结

第五章CAD的表达及鉴定

5.1材料和试剂

5.2试验方法

5.2.1双酶切重组质粒(pEASY-T/CAD)和供体质粒(pFastBacHTb)

5.2.2胶回收

5.2.3连接

5.2.4转化至TOP10

5.2.5质粒DNA的提取

5.2.6双酶切及PCR鉴定

5.2.7 DH10Bac感受态细胞的制备

5.2.8 转化至DH10Bac

5.2.9提取杆粒Bac/CAD DNA

5.2.10 PCR鉴定

5.2.11共转染

5.2.12亲和能力测定(采用ELISA)

5.3结果与分析

5.3.1重组转移载体pFastBacHTb/CAD的构建

5.3.2重组杆状病毒的鉴定

5.3.3重组病毒转染Tn细胞

5.3.4 CAD在昆虫细胞中的表达

5.3.5亲和能力测定

5.4小结

第六章 结论

参考文献

致谢

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