甘蓝（Brassica oleracea var.capitata）显性雄性不育基因分子标记辅助育种研究

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引言

1甘蓝类作物雄性不育的研究

2分子标记工具

2.1 RFLP标记技术

2.2 RAPD标记技术

2.3 SCAR标记技术

2.4 STS标记技术

2.5 SSR标记技术

2.6 ISSR标记技术

2.7 AFLP标记技术

2.8其它新型标记技术

2.9几种常见DNA指纹图谱技术的比较

3标记筛选方法

3.1作图法

3.2近等基因系法(Near-isogenic lines，NIL)

3.3分离群体分群分析方法

3.4选择性基因型分析

4分子标记在甘蓝类作物研究中的应用

4.1分子标记在甘蓝遗传资源与遗传多态性研究中的应用

4.2甘蓝类作物分子标记图谱的构建

4.3甘蓝类作物一些重要性状的分子标记研究

4.4显性雄性不育分子标记辅助选择

5本研究的目的与意义

材料和方法

1实验材料

1.1显性雄性不育基因纯合标记的初步筛选所用材料

1.2显性雄性不育基因纯合标记的初获标记群体检测所用材料

1.3常规育种材料

1.4甘蓝显性雄性不育分子标记连锁图谱的构建所用材料

2研究方法

2.1基因组DNA快速提取

2.2 AFLP分析体系

2.3显性雄性不育纯合基因标记的筛选检测策略

2.4 AFLP银染检测目标片段的挖带回收与纯化

2.5纯化后目标片段的测序

2.6基因组PCR步行法实现目标片段的延伸

2.7目标片段的克隆与测序

2.8 SCAR引物设计

2.9 SCAR-PCR扩增及检测

2.10 SCAR标记的群体检测

2.11纯合不育标记应用的扩增及检测策略

2.12田间育性调查

2.13数据分析处理

结果与分析

1基因组DNA的提取

2纯合显性雄性不育基因型标记的筛选

2.1 03A纯合显性雄性不育基因型标记的筛选

2.2 03B纯合显性雄性不育基因型标记的筛选

2.3 03B三种基因型5个材料银染验证

2.4 03A纯合显性雄性不育标记筛选03B材料

2.5纯合不育标记结果的群体验证

3 e33m52转化SCAR标记

3.1纯合不育标记e33m52的回收测序

3.2基因组PCR步移基因特异引物的设计

3.3纯合不育标记e33m52基因组PCR步移结果检测

3.4 SCAR标记的引物设计

3.5 SCAR标记的群体检测

4显性雄性不育基因纯合标记应用范围检测

5显性雄性不育基因高密度连锁图谱的构建

5.1田间调查

5.2与雄性不育基因相连锁标记的验证

5.3数据分析

讨论

1鉴定纯合显性雄性不育基因型的AFLP标记筛选

2连锁分子标记辅助基因转育的适用范围

2.1显性雄性不育基因相斥相分子标记的应用

2.2显性雄性不育基因相引相分子标记的应用

3 SCAR标记的应用

4连锁图谱的构建

4.1 AFLP作图效率评价及其影响因素

4.2甘蓝显性雄性不育基因连锁图的构建

4.3选择合适的群体是寻找与表型性状相连锁标记的关键

5遗传滞留现象

6分子标记辅助选择体系的建立

结论

参考文献

附录

致谢

作者简历