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p38MAPK红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

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研究表明,p38除了参与细胞的生长分化、周期和凋亡等过程的调控外,还在LPS等刺激引起的炎症和应激反应中起重要作用.为了研究p38MAPK的细胞内定位情况,研究人员利用基因工程的方法构建了四种p38亚型的红色荧光蛋白融合表达载体并在哺乳动物细胞中进行了表达.首先通过PCR反应将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的四种p38亚型扩增出来,PCR产物分别用HindIII和BamHI/BglII酶切后与HindIII和BamHI酶切的pDsRedl-Nl载体连接.将连接反应混合物转化感受态大肠杆菌株DH5a,挑克隆提取质粒后进行重组体鉴定.经酶切PCR和DNA序列分析鉴定确证无误后将重组质粒转染铺于24孔板的上皮细胞系HeLa和单核细胞系WEHI,以探讨RFP融合蛋白在细胞内蛋白定位中的应用前景.转染后36h,将细胞固定后在荧光显微镜下以558nm为激发波长,583nm为吸收波长观察四种p38亚型在细胞内的表达情况并照相.该项研究构建的RFP融合的p38表达载体为阐明p38MAPK的细胞内定位和激活后移位机制提供了一个重要工具.

著录项

作者
龚小卫;
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作者单位

南方医科大学;

第一军医大学;

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授予单位南方医科大学;第一军医大学;
学科病理生理学
授予学位硕士
导师姓名姜勇;
年度 2001
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类病理生理学;
关键词
p38丝裂原激活蛋白激酶; 细胞内定位; 红色荧光蛋白; 载体构建基因表达; 信号转导;

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