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胶体金免疫层析法快速检测流感病毒抗原方法的建立及应用研究

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第一部分胶体金免疫层析法快速检测流感病毒抗原方法的建立

材料与方法

结果

讨 论

第二部分胶体金免疫层析法快速检测流感病毒感染的应用研究

材料和方法

结果

讨 论

全文结论

照片

参考文献

文献综述流感病毒的实验室检测方法及进展

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摘要

背景:流行性感冒(简称流感)是由流行性感冒病毒引起的急性呼吸道传染病，其具有传染性强，蔓延快及波及面广的特点。流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，还需要实验室检测来证实。现比较常用的检测流感病毒的方法主要有病毒分离培养，酶免疫技术、间断免疫荧光法及PCR技术。其中病毒的分离培养和间接免疫荧光法(IFA)均被认为是诊断流感的金标准，但病毒分离培养整个过程往往需要2-14天，故对流感的早期诊断帮助不大；而IFA检测病毒抗原是一种比较快速而准确的方法，因其具有稳定、敏感、特异性强的优点，被广泛应用，但其缺点是需价格昂贵的免疫荧光显微镜，工作人员需具有一定的经验。免疫胶体金技术是近年来发展起来的新方法，具有操作简单、快速、准确和无污染等优点，该技术提供了很好的技术平台，可能是一种更加便捷的检测流感病毒抗原的好方法。 目的：建立有效、简便的胶体金免疫层析方法( GICA)快速检测流感病毒感染。并应用此方法快速检测呼吸道疾病患者的流感病毒感染抗原，分析流感病毒感染的规律和特点。 方法： 1.检测对象为2007年2月-2009年1月期间在呼吸科住院的1042例各类呼吸道疾病患者，应用GICA法检测患者鼻咽部分泌物的流感病毒A、B抗原(FluA、B)，并同时用IFA法作对照，以验证GICA法检测流感病毒抗原的敏感性和特异性。对其中GICA法检测流感病毒抗原阳性的60例标本，及阴性的10例标本同时行病毒分离培养，进一步证实GICA法的可靠性。 2.分别应用鼻、咽拭子法和鼻咽部细导管负压吸引法两种不同方法采集患者鼻咽部分泌物，均经GICA法快速检测分泌物标本中的Flu A、B抗原，对两种不同采集方法的结果做出评价。 3.对1042例各类呼吸道疾病患者应用GICA法检测Flu A、B抗原的结果进行分析，并对在不同季节，不同性别、年龄、病种及是否合并基础病的呼吸道疾病患者的流感 结果： 1.GICA法与IFA法检测Flu A、B结果有较好的一致性，两种方法检测结果之间差异无统计学意义(P>0.05)。病毒培养法与GICA法检测Flu A、B结果符合率较高。 2.使用鼻、咽拭子法及鼻咽部细导管负压吸引法采集患者鼻咽部分泌物快速检测Flu A、B，所得结果有较好的一致性，两种方法差异无统计学意义(P>0.05)。 3.第一季度、四季度分别与第二、第三季度患者的Flu A、B检出率比较，两组结果差异有显著性意义，第一、第四季度Flu A、B的检出率高于其它二个季度。 男、女性别患者之间Flu A、B阳性检出率结果差异无统计学意义。 65岁以上及以下患者组FluA、B检测阳性率差异有显著性意义，老年患者(≥65岁)FluA、B检出率高。 没有基础病的患者与合并一种、二种及三种以上基础病患者Flu A、B检出率比较，差异有统计学意义，显示随着合并基础病种类增多，Flu A、B阳性检出率增高。’ 各种疾病中COPD急性发作组(18.7％)及肺炎组(17.4％)Flu A抗原检出率较其它病种高。 结论： 1 GICA法快速检测患者鼻咽部分泌物中的Flu A、B抗原，操作简单、方便、快速，特异性、敏感性均较高，在临床患者流感病毒感染的检测中具有较好的应用价值。 2.用鼻、咽拭子方法取材可靠，较鼻咽部细导管负压吸引法更加快捷、方便。 3.呼吸科病房住院患者中全年均有有流感的散发病例，第一、四季度多见。老年患者及有基础疾病患者并发流感病毒感染风险较大，在COPD急性发作及肺炎组患者中Flu A检出率较高。

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