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人胎儿间充质干细胞体外分离培养及诱导分化为类肝细胞的实验研究

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主要英文缩写一览表

前 言

第一部分人胎儿间充质干细胞的体外分离培养及细胞生物学特性观察

分题一人胎儿骨髓间充质干细胞的体外分离培养及细胞生物学特性观察

材料与方法

结 果

讨论

结论

参考文献

分题二人胎儿脐带血间充质干细胞的体外分离培养及细胞生物学特性观察

材料与方法

结 果

讨论

结论

参考文献

分题三人胎儿肝脏间充质干细胞的体外分离培养及细胞生物学特性观察

材料与方法

结 果

讨论

结论

参考文献

总结

第二部分人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的建立及优化

材料与方法

结 果

讨论

结论

参考文献

第三部分人胎儿骨髓间充质干细胞来源类肝细胞的分子生物学鉴定

材料与方法

结 果

讨论

结论

参考文献

第四部分人胎儿骨髓间充质干细胞来源类肝细胞的功能和超微结构评估

材料和方法

结 果

讨 论

结论

参考文献

全文总结

本课题创新之处

致 谢

文献综述一成体干细胞的可塑性及对肝损伤修复的重建作用

参考文献

文献综述二异种肝细胞移植研究现状

参考文献

博士研究生期间发表文章目录

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摘要

目的:1.建立人胎儿骨髓、脐带血和肝脏间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的分离培养方法,观察细胞生物学特性和细胞表型,获得大量的人源性MSCs.2.人胎儿MMSCs体外向类肝细胞诱导分化的条件建立及优化.3.人胎儿MMSCs来源类肝细胞的分子生物学鉴定.4.人胎儿MMSCs来源类肝细胞的功能和超微结构评估.结论:人胎儿MMSCs分离成分单纯,容易成功,增生旺盛,作为组织工程重建的种子细胞具有较强的可行性.从脐带血中成功分离MSCs的几率为20﹪,但脐带血来源广泛,无伦理学争议,所获得的MSCs也具有良好的增殖能力,也可作为MSCs的来源.肝非实质细胞中也含有MSCs,且量比较大,也可成为种子细胞.我们建立了多条获取人源性MSCs的途径,为MSCs的分化及大规模临床应用奠定基础.通过比较三种来源MSCs各自的优点和不足,我们选择人胎儿骨髓来源的MSCs进行体外诱导分化.细胞分化受细胞基质、细胞因子、细胞密度等影响,在无血清培养条件下,设计了多组诱导方案,证实按诱导4组的方案1﹪Matrigel作基质,2.5μmol/ml AZA预处理10~12h,HGF 10ng/ml+FGF4 10ng/ml+HGM培养基可获得61﹪~65﹪的类肝细胞.MMSCs经诱导后于第4d时表达GATA4、CK19、AFP;第7d后以时间依赖方式表达原始、成熟肝细胞标志CK18、ALB、GST-π和HNF1α.MMSCs向类肝细胞的横向分化是先分化为肝前体细胞,再分化为成熟肝细胞,在该实验诱导条件下可获得在转录及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞.诱导后MMSCs以时间依赖方式产生ALB及尿素,细胞内可见糖原染色明显增强,超微结构显示细胞已分化并且有上皮细胞样极性结构特征,提示已具备类肝细胞特有的结构和功能性特征.

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