目的:p53蛋白是大家熟知的一个肿瘤抑制蛋白,目前对p53蛋白相关基因的研究主要集中在对p53蛋白促凋亡功能的调节.最近发现了一个新的蛋白家族——p53促凋亡蛋白(apoptosis stimulating protein of p53,ASPP),它有三个成员,即ASPP<,1>、ASPP<,2>、iASPP((Inhibitory member of the ASPP family),ASPP<,1>、ASPP<,2>能显著性增强p53的促凋亡功能,而iASPP则是p53促凋亡功能的一个抑制子.该次实验利用RT-PCR方法检测ASPP基因家族mRNA在8种肿瘤细胞株的表达水平,揭示ASPP基因家族mRNA的表达量与肿瘤的发生发展的关系,同时了解ASPP基因家族与p53的相互作用机制;利用internet网上免费引物设计对ASPP<,1>与ASPP<,2>基因启动子的CpG岛进行分析并设计甲基化特异性PCR(Methylathen Specific PCR, MSP)引物,同时利用MSP方法检测ASPP<,1>与ASPP<,2>基因启动子甲基化状况,探讨ASPP<,1>与ASPP<,2>在肿瘤细胞中异常表达的原因.结论:1.国内首次用RT-PCR方法检测ASPP基因家族mRNA的表达,并发现ASPP基因家族mRNA在所有肿瘤细胞株中均有表达.2.通过Gel-Pro3.1凝胶图像分析软件对电泳图片半定量分析发现:肿瘤细胞株中ASPP<,1>和ASPP<,2>基因mRNA的表达量均低于正常细胞,iASPP基因mRNA的表达量均高于正常细胞.结论:在促p53的促细胞凋亡功能中,ASPP<,1>和ASPP<,2>基因为正向调节,iASPP基因为反向调节.甚至在p53突变的肿瘤细胞中ASPP<,1>和ASPP<,2>也能抑制肿瘤细胞生长.3.首次应用internet对ASPP<,1>和ASPP<,2>基因进行CpG岛分析,并发现ASPP<,1>和ASPP<,2>基因在它们的第一个CpG岛中CG序列含量丰富.表明它们在第一个CpG岛容易发生甲基化.4.首次应用网上免费引物设计软件MSP3.4设计ASPP<,1>和ASPP<,2>基因MSP引物,建立检测ASPP<,1>和ASPP<,2>基因CpG岛甲基化状况的方法——MSP.5.首次对3株p53野生型肿瘤细胞株(A549、HEPG-2、MCF-7)和成纤维细胞中ASPP<,1>与ASPP<,2>基因CpG岛甲基化状况检测发现:3株p53野生型肿瘤细胞株中ASPP<,1>与ASPP<,2>基因CpG岛出现甲基化;成纤维细胞中ASPP<,1>与ASPP<,2>基因CpG岛没有出现甲基化.结果提示:ASPP<,1>与ASPP<,2>基因CpG岛的甲基化状况可能与肿瘤的发生有关.
展开▼
