miR-1246的靶基因验证及其在高温诱导下对牛肺细胞凋亡的影响

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miR-1246定位于人2号染色体长臂31区1亚带（2q31.1）。研究表明，miR-1246的表达受 p53调控，并参与调节生长发育、新陈代谢、自身免疫、细胞増殖调亡、逆境胁迫等生物学过程。
　　本课题组前期研究证明，miR-1246在热应激期与非热应激期的牛血液中含量具有显著差异（P＜0.05）。但miR-1246是否参与机体热应激调控尚不清楚。为进一步揭示miR-1246对热应激牛机体的调控作用，本研究首先利用生物信息学方法对miR-1246靶基因进行了初步分析。结果显示，cAMP应答元件结合蛋白类似因子（CREBL2）、多聚胞嘧啶结合蛋白（PCBP2）、锌指蛋白类似因子（ZFP36L1）等基因mRNA的3’非翻译区（3’UTR）含有miR-1246的结合位点；进一步对这些miR-1246的潜在靶基因功能和参与的信号通路分析发现其主要富集在肿瘤发生相关通路中。为验证 miR-1246对这些潜在靶基因的调控作用，我们分别扩增了CREBL2、PCBP2和ZFP36L1基因3’UTR序列，并合成了 miR-1246过表达（miR-1246 mimic）和对照（NC）质粒，并通过转染HEK293细胞进行双荧光素酶报告基因分析发现miR-1246过表达能极显著下调CREBL2和PCBP2基因表达水平（P＜0.01）。进一步通过 Real-time PCR和 Western Blot技术分析发现， miR-1246对CREBL2和PCBP2基因mRNA和蛋白表达均有显著抑制作用（P＜0.05）。
　　根据已有的研究，CREBL2和PCBP2的功能主要与细胞凋亡和生长抑制相关。本研究最后利用 DAPI细胞核染色技术、Annexin V-FITC/PI流式细胞双染技术对热应激条件下牛肺细胞的分析发现，miR-1246能减轻热应激后牛肺细胞的凋亡和缓解热应激牛肺细胞发生G2/M期阻滞。以上结果表明，miR-1246可能通过抑制细胞凋亡来调控机体热应激应答反应。
　　总之，本研究从体外水平上揭示了miR-1246是机体热应激生理代谢的重要转录调控因子，为寻找更有效的缓解热应激的方法提供了参考。

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作者
胡煜;
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作者单位

西南大学;

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授予单位西南大学;
学科动物遗传育种与繁殖
授予学位硕士
导师姓名左福元,王玲;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类牛;基因工程（遗传工程）;
关键词
热应激; 细胞凋亡; 牛; 靶基因验证; 高温诱导; 逆境胁迫;

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