层流切应力诱导microRNA--101下调EZH2抑制内皮细胞血管新生

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目的：通过研究层流切应力诱导microRNA-101下调EZH2抑制内皮细胞血管新生，进一步阐述层流切应力对血管内皮细胞功能的影响机制。方法：以人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells，ECs)为研究对象，Ecs经15dyn/cm2处理3、6、12h行Realtime--PCR(RT-PCR)检测microRNA101(miR-101)表达;转染miR-101、miR-101抑制剂(miR-101inhibitor)，以空载体Neg-control(NC)及Inhibittor Neg-ontrol(INC)为相应对照组，24h后蛋白免疫印迹法检测蛋白Zeste增强同源物2(Enhancer of ZesteHomolog2，EZH2)表达;转染miR-101 inhibitor、INC24h，上述两组又分为层流切应力处理组及无层流切应力处理12h后，蛋白免疫印迹法检测蛋白EZH2; ECs转染NC、miR-10124h细胞消化种于matrigel胶孵育12h，倒置显微镜拍照观察血管新生情况;ECs转染1NC、miR-101 inhibitor24h，上述两组又分为EZH2干扰RNA(EZH2 siRNA)处理组和空载体siRNANeg-ontrol(siRNA-NC)处理组，48h后细胞消化种于matrigel胶孵育12h观察血管新生情况;转染miR-101 inhibitor、INC24h，上述两组又分为层流切应力处理组及非层流切应力处理12h后，消化种于matrigel胶孵育12h后，观察血管新生情况，倒置显微镜拍照观察血管新生情况;所有数据采用SPSS统计软件分析。结果：⑴层流切应力处理内皮细胞，RT-PCR检测miR-101表达上调，与无切应力处理组差异有统计学意义(P＜0.05)，表明层流切应力可使miR-101表达上调；⑵转染miR-101、NC、miR-101 inhibitor、INC检测EZH2含量。转染miR-101组较NC组EZH2表达明显减少，两组间差异有统计学意义P＜0.01;转染miR-101 inhibitor组较INC组EZH2表达明显增加，两组间差异有统计学意义P＜0.01。表明miR-101可抑制EZH2表达；⑶ECS转染1NC，并分为切应力处理组和无切应力处理组，切应力处理组较无切应力处理组EZH2表达减少，差异有统计学意义P＜0.01，证明层流切应力可抑制EZH2表达;再转染miR-101 inhibitor，抑制miR-101，如上述分为切应力处理组和无切应力处理组，切应力处理组与无切应力处理组EZH2表达无明显差别，差别无统计学意义P＞0.05，抑制miR-101后，层流切应力无明显抑制EZH2作用，说明层流切应力是通过诱导miR-101来抑制EZH2表达；⑷ECs转染NC、miR-101并观察血管新生情况，miR-101组较NC组血管新生减少，差异有统计学意义P＜0.05，表明miR-101有抑制内皮细胞血管新生作用；⑸ECs转染INC，并分为EZH2 siRNA处理组和siRNA NC对照组，EZH2 siRNA处理组较siRNA NC对照组血管新生减少，差异有统计学意义P＜0.05，表明抑制EZH2可抑制血管新生;ECs转染miR-101 inhibitor，并分为EZH2 siRNA处理组和siRNA NC对照组，则EZH2 siRNA处理组较siRNA NC对照组血管新生无明显差异，差异有统计学意义P＞0.05，表明抑制miR-101后EZH2无表抑制血管新生作用；⑹ECS转染INC，再分为切应力处理组和无切应力处理组，切应力处理组较无切应力处理组血管新生减少，差异有统计学意义P＜0.01，表明层流切应力可抑制血管新生;转染miR-101 inhibitor，抑制miR-101，再分为切应力处理组和无切应力处理组，观察血管新生，切应力处理组与无切应力处理组血管新生无明显差别，差别无统计学差异P＞0.05，表明抑制miR-101后，层流切应力无明显抑制血管新生作用; 结论：①层流血管切应力可使miR-101表达上调；②miR-101可抑制EZH2基因表达；③层流切应力诱导miR-101抑制EZH2表达；④miR-101可抑制血管新生；⑤miR-101通过抑制EZH2表达抑制血管新生；⑥层流切应力诱导miRAN101下调EZH2抑制血管新生。

著录项

作者
陈国军;
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作者单位

广东医学院;

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授予单位广东医学院;
学科心血管内科
授予学位硕士
导师姓名胡雪松;
年度 2014
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类等离子体物理学;
关键词
层流; 应力诱导; EZH2; 抑制; 内皮细胞;

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