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【6h】

3种类型CpG单链寡核苷酸对哮喘小鼠Th/Th2细胞因子IFN-γ、IL-4的影响

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摘要

[目的]
   利用人工合成A、B、C三种类型的CpG-ODN(分别以ODN-1585、ODN-1826、ODN-M362为代表),将其注射于哮喘小鼠腹腔,检测注射后小鼠BALF中白细胞总数、EOS计数及Th1细胞因子IFN-γ、Th2细胞因子IL-4的变化,探究三种不同类型的CpG-ODN对哮喘小鼠气道炎症细胞及Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-4的影响,为CpG-ODN进一步应用提供依据。
   [方法]
   ①50只清洁级雌性昆明小鼠,体重(20±3)克,随机分5组:A组(正常对照组)、B组(哮喘组)、C1组(ODN-1585干预组)、C2组(ODN-1826干预组)、C3组(ODN-M362干预组)。②B、C1、C2、C3组分别注射鸡卵白蛋白(OVA)抗原0.5ml(含氢氧化铝凝胶2mg和OVA15μg)致敏,第7、14d时各重复一次,第21d始以1%OVA雾化吸入以诱发小鼠哮喘发作,每天2次,每次1h,连续3d。A组给予生理盐水腹腔注射以及雾化吸入。C1、C2、C3组每次雾化前30min分别给予CpG-ODN腹腔注射(50μg/只),而A、B组给予0.5ml生理盐水腹腔注射。③第24天给小鼠行摘除眼球放血、处死,留取血清,结扎右肺,灌洗d左肺,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。灌洗完毕后取右肺作HE切片,光镜下观察各组小鼠肺组织病理改变,检测小鼠BALF中白细胞总数、EOS数。④采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠BALF及血清中Th1和Th2细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,统计其有无差异性。
   [结果]
   ①哮喘模型组(B组)支气管肺泡呈现显著性病理改变,白细胞、EOS增多,管腔狭窄,粘膜下水肿。而正常对照组(A组)支气管肺组织结构正常,无明显炎性细胞浸润,肺泡壁清晰完整,间隔形态正常;3个CpG-ODN干预组(C1、C2、C3组)病理改变较B组轻,但3组之间镜下病理改变无明显差别。
   ②B组BALF中白细胞总数和EOS计数均显著高于A组(P<0.01),C1、C2、C3组白细胞总数和EOS计数均低于B组(P<0.01);B组血清及BALF中的IL-4浓度高于A组(P<0.01),C1、C2、C3组血清及BALF中的IL-4浓度低于B组(均为P<0.01);B组血清及BALF中的IFN-γ浓度低于A组(p<0.01),C1、C2、C3组血清及BALF中的IFN-γ浓度高于A、B组(均为P<0.01)。
   ③3个CpG-ODN干预组比较,C3组BALF中白细胞总数和EOS计数低于C1、C2组(P<0.01),C1组与C2组之间无明显差异(P>0.05).
   ④3个CpG-ODN干预组比较,C3组血清及BALF中IL-4浓度低于C1、C2组(P<0.01),C1与C2组之间无明显差异(P>0.05):C3组小鼠血清中IFN-γ浓度高于C1、C2组(P<0.01),C1组高于C2组(P<0.01);而C1组BALF中IFN-γ浓度高于C2、C3组(P<0.01),C2与C3组之间无明显差异(P>0.05).
   [结论]
   ①3种类型CpG-ODN治疗干预可明显抑制哮喘小鼠体内升高的IL-4水平,升高哮喘小鼠体内IFN-γ水平。提示CpG-ODN对抗原诱发的Th1/Th2反应有逆转作用;在3种类型的CpG-ODN中,以ODN-M362为代表的C型CpG-ODN较A、B型CpG-ODN能减轻哮喘小鼠气道白细胞、EOS浸润,抑制气道炎症反应。
   ②在3种类型的CpG-ODN中,以ODN-M362为代表的C型CpG-ODN较A、B型对哮喘小鼠Th1/Th2失衡有较好的逆转作用,主要体现在降低细胞因子IL-4水平上。这对于我们在选择最佳类型的CpG-ODN用于哮喘的治疗上有着重要意义。

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