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【6h】

ZER6在结肠癌组织中的表达分析及其对结肠癌细胞周期调控的研究

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目录

英文缩略词对照表(Abbreviation index)

1 绪论

1.1 研究背景

1.2 本课题的提出及主要内容

2 ZER6在结肠癌组织中的表达

2.1 引言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5 本章小结

3 ZER6对HCT116细胞增殖的影响

3.1 引言

3.2 实验材料

3.3 实验方法

3.4 实验结果

3.5 本章小结

4 ZER6对HCT116细胞周期的影响

4.1 引言

4.2 实验材料及仪器设备

4.3 实验方法

4.4 实验结果

4.5 本章小结

5 ZER6对p21的调控机制研究

5.1 引言

5.2 实验材料及设备

5.3 实验方法

5.4 实验结果:

5.5 本章小结

6 ZER6两种异构体蛋白对HCT116细胞的作用

6.1 引言

6.2 实验材料及试剂

6.3 实验过程

6.4 实验结果

6.5 本章小结

7 结论与展望

7.1 主要结论

7.2 后续工作展望

致谢

参考文献

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摘要

背景:结直肠癌是全球第三大恶性肿瘤,平均每年新发病120万余人,直接或间接导致60万余人死亡,而近几年来发病人群开始向年轻化趋势发展。虽然结直肠癌的诊治技术取得了很大进步,但是转移和复发使结肠癌的生存率一直不能令人满意。因此阐明结直肠癌发生发展的相关分子机制,为临床诊治提供科学理论依据就显得非常重要。KRAB型锌指蛋白是人类基因组中重要的转录调节因子,能够参与细胞增殖、分化、凋亡和癌变等多种重要生命活动。ZER6是一种典型的KRAB型锌指蛋白,该基因转录时5’端剪切方式不同,可以翻译形成p71-ZER6与p52-ZER6两种异构体蛋白。有研究表明,p52-ZER6在雌二醇介导下与ERα结合,p71-ZER6则不与之结合;ZER6能够通过调节两种异构体蛋白的表达来参与调控激素敏感型乳腺癌的进展。然而,ZER6与结肠癌的发生发展的关系及其对结肠癌HCT116细胞功能的影响,尚未见研究报道。
  目的:⑴明确在临床结肠癌组织中ZER6的表达情况与结肠癌发生发展的关系。⑵探究ZER6对HCT116细胞增殖及细胞周期的影响,并探索其作用机制。⑶考察ZER6两种异构型蛋白对HCT116细胞的不同调控作用。
  方法:①用RT-PCR和Western Blot的方法检测结肠癌组织样本中ZER6 RNA和蛋白表达情况。②用敲减质粒抑制ZER6表达,用CCK-8、结晶紫染色和EdU染色考察ZER6敲低对HCT116细胞增殖的影响,用流式细胞技术检测ZER6敲低对细胞周期的影响,用双荧光素酶报告基因系统、RT-PCR和Western Blot探究ZER6可能参与调节的信号通路。③用敲减质粒分别抑制p71-ZER6与p52-ZER6表达,用RT-PCR、Western Blot、CCK-8、结晶紫染色和EdU染色考察ZER6两种异构体蛋白对HCT116细胞的影响。
  结果:⑴临床组织样本RT-PCR和Western Blot结果显示,在转录和翻译水平上, ZER6在结肠癌组织较相应的癌旁正常组织都呈现明显高表达。⑵CCK-8、结晶紫染色、EdU染色和流式细胞技术检测结果表明,ZER6敲低诱导HCT116细胞发生G0/G1期停滞,抑制HCT116细胞增殖。⑶双荧光素酶报告基因系统、RT-PCR和Western Blot结果显示,ZER6敲低可以显著提高p21转录活性,明显增加p21蛋白表达,进而抑制细胞周期素Cyclin D1和Cyclin E2的蛋白表达。⑷在分别探究 ZER6两种异构型蛋白对 HCT116细胞的作用时,结果显示p71-ZER6敲低对p21没有明显影响;而p52-ZER6敲低能够显著提高p21转录活性,促进p21蛋白表达,进而抑制细胞周期素Cyclin D1和Cyclin E2蛋白表达,最终抑制 HCT116细胞增殖;p52-ZER6过表达则能显著抑制 p21的表达,促进Cyclin D1和Cyclin E2的表达。
  结论:①ZER6在结肠癌组织中高表达,因此ZER6的表达量可以作为判断结肠癌预后的一项生化指标。②由于p52-ZER6敲低可以显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,提示p52-ZER6可以作为一个潜在的结肠癌治疗的靶点,为结肠癌的诊治提供理论依据和科学指导。

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