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串联质谱检测正常儿童干血滤纸片中游离肉碱和酰基肉碱含量

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综述：肉碱与疾病的研究进展

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摘要

目的：建立一种简便、快捷的检测干血滤纸片中肉碱类化合物的方法。通过对0～13岁正常儿童干血滤纸片中游离肉碱和酰基肉碱含量的检测，对我国南方地区儿童体内游离肉碱及酰基肉碱水平进行了统计分析，为脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断提供参考范围。 方法：取直径5mm的干血滤纸片，加入含有游离肉碱和酰基肉碱的同位素内标，用甲醇萃取,萃取物过滤后直接上机分析，采用ESI+-MS/MS进行检测，数据采集采用多反应监测模式（MRM）对13种肉碱类化合物进行了检测。以美国CDC提供的质控样品作方法学验证。应用该法对277例0～13岁正常儿童的外周血干血滤纸片酰基肉碱进行检测。分6个年龄段组1（新生儿组）：年龄～28天，孕周≥37周；组2：年龄～6月；组3：年龄～12月；组4：年龄～3岁；组5：年龄～6岁；组6：年龄～13岁。应用SPSS 17.0分析软件对数据进行统计分析。 结果：本实验建立的方法重复性好，各物质在低、中、高三个浓度级别的批内变异系数和批间变异系数都小于15%。各物质实测浓度与加入浓度之间的相对偏差在0.1%-27.2%。线性范围满足临床检测需要。通过比较各个年龄段儿童干血滤纸片法酰基肉碱类化合物含量发现：1.3-羟基异戊酰肉碱（C5OH）随着年龄的增大，含量下降。2.～28天组（组1）；辛酰肉碱(C8) 较其它年龄组的低；乙酰肉碱（C2）、十二酰肉碱(C12)、十四酰肉碱(C14)较其它年龄组的高。3.～6月组（组2）：游离肉碱（C0）比～28天组（组1）和其它较大年龄组高；乙酰肉碱（C2）比其他较大年龄组高。4.～12月（组3）乙酰肉碱（C2）比其他较大年龄组高。5.～6岁年龄（组5）十四酰肉碱(C14)比其它小年龄组的低。6.～13岁组（组6）癸酰肉碱（C10）比其它较小年龄组高。7.丙酰肉碱（C3）、丁酰肉碱（C4）、异戊酰肉碱（C5）、己酰肉碱(C6)这些中、短酰基肉碱受年龄因素影响不大。用本方法诊断脂肪酸β-氧化代谢障碍1例。 结论：同位素稀释-非衍生化串联质谱法对干血滤纸片中游离肉碱和酰基肉碱进行分析,能够达到满意的精确度和准确度,每个样品前处理加上机分析只需要3小时，是一项简便、快捷检测方法，适合应用于临床检测。本研究提供的我国南方地区0～13岁正常儿童干血滤纸片酰基肉碱含量参考值范围，可以为脂肪酸代谢障碍和有机酸血症疾病的诊断、鉴别诊断、治疗提供有意义的参考。

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