鹦鹉热衣原体检测技术研究及重庆鹦鹉热衣原体流行病学调查

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鹦鹉热衣原体（Chlamyida psittaci）引起的人畜共患病日趋严重，但其诊断尚缺乏准确快速的检测手段。因此迫切需要建立准确、快速的鹦鹉热衣原体PCR和RT-QPCR检测方法。为此，我们利用PCR和RT-QPCR建立了准确、快速的检测方法，研制出鹦鹉热衣原体PCR检测试剂盒；利用建立的定量PCR检测初步探索了鹦鹉热衣原体感染同检测间的量化关系；并利用建立的PCR方法同IHA方法对比进行流行病学调查。本研究主要获得以下研究结果：
　　①鹦鹉热衣原体PCR检测方法的建立。利用NCBI上公布的鸟源主要外膜蛋白MOMP基因序列（PSITTACI457203）设计引物，利用鸭源 CS1 DNA为模板，通过优化反应体系，得到100 bp的目标检测片段，建立了鹦鹉热衣原体的PCR检测方法，灵敏度可以达到2.5×10-5 ng/μl模板量，构建了鹦鹉热衣原体PCR检测试剂盒。
　　②鹦鹉热衣原体Real-time quantitative PCR检测方法的建立。将PCR扩增得到的目标片段作为Real-time quantitative PCR的模板和阳性对照，利用两种定量PCR仪分别建立了鹦鹉热衣原体定量 PCR反应体系。所建立的Real-time quantitative PCR检测方法，在模板浓度范围1.78×102-1.78×108拷贝/μl时，其线性相关系数达到0.998；融解曲线只有唯一的峰值，Tm值为79.1℃；批内和批间变异系数(CV％)分别为1.30-4.59%和5.72-9.87%。
　　③利用建立的鹦鹉热衣原体Real-time quantitative PCR检测方法进行小白鼠感染的量化分析试验。通过对随机分成的7组，每组12只的小白鼠，一组为对照组，其他各组同时腹腔注射Cps菌液，每天进行1次抽样检测，监控小白鼠感染后的体内 Cps量的变化关系，初步探索了动物 CPS感染和Real-time quantitative PCR检测的量化关系。
　　④对重庆市6个区县不同养殖环境下的禽类随机采集血清样品400份和相对应的组织样品430份，利用IHA诊断试剂盒初步检测筛选出可疑样品，然后利用本研究构建的鹦鹉热衣原体PCR反应体系对可疑样品进行进一步检测。对IHA检测出的157分阳性血清所对应的157份组织样品进行PCR检测，共检出146份样品呈阳性，检出样品的阳性率为93.0%，结果表明所建立的鹦鹉热衣原体PCR检测方法的特异性和稳定性均较好。

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作者
吴东海;
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作者单位

重庆大学;

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授予单位重庆大学;
学科微生物学
授予学位硕士
导师姓名李正国;
年度 2008
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R181.32;R374.2;
关键词
重庆市; 鹦鹉热衣原体; PCR检测; 流行病学调查;

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