基于表面等离子共振生物传感器的核酸检测新技术研究

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核酸是一类最基本的物质，在生物体遗传信息的存储、复制和传递的过程中起着至关重要的作用，是生命科研领域的热点之一。获取目标核酸的序列、浓度等信息，对基因诊断、基因筛选、检测基因变异以及新药开发等领域具有重大意义。因此，建立快速、操作便利、灵敏的核酸检测方法是非常必要的。核酸生物传感器是将特定序列的探针分子偶联在传感芯片表面，通过与靶核酸杂交并将杂交信息以电信号、光信号等形式表达并检测出来，是核酸研究的重要手段。表面等离子共振生物传感器以其不需要标记、简单灵敏、特异性好、所需样品量少、成本低廉、可在线监测结合反应的动态过程等显著优点而成为研究分子间相互作用的先进手段，并广泛的应用于生物分子的检测领域。本研究以表面等离子共振生物传感器为技术手段，整合分子生物学、分析化学和临床检验诊断学技术，发展了简单灵敏的核酸检测方法。本研究主要包括以下两个部分:
　　1.发展表面等离子共振核酸传感器高灵敏的检测沙门氏菌。
　　建立了一种基于表面等离子共振DNA生物传感器的免标记、高灵敏的沙门氏菌检测方法。根据沙门氏菌特异性invA基因设计生物素修饰的单链寡核苷酸探针并固定在葡聚糖/亲和素芯片表面。将invA基因从细菌菌体中提取出来并用不对称PCR扩增。该传感器检测靶基因在浓度范围为5nM-1000nM内具有很好的线性关系，最低检出限为0.5nM。该传感器对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌没有响应，表明具有很高的特异性。整个杂交检测过程仅需要15分钟。芯片能够重复使用300次以上。该方法灵敏特异，无需标记，可用于沙门氏菌各血清型的检测，具有很大应用潜力。
　　2.构建表面等离子共振生物传感器用于miRNA的高灵敏检测。
　　建立了基于表面等离子共振技术的miRNA的灵敏、特异的检测方法。与目标miRNA互补的巯基标记的DNA探针吸附在芯片表面，特异性识别目标miRNA后，捕获的目标miRNA再结合另一连接有亲和素的识别探针。这种“三明治”的结合模式能够显著的增加响应信号，并提高传感器灵敏度约24倍。最低检测限为1.7fM，同时能够识别单碱基错配。整个分析过程仅需30分钟。芯片能再生使用30次以上。该方法已成功用于实际样本miRNA的检测。

著录项

作者
张德才;
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作者单位

重庆医科大学;

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授予单位重庆医科大学;
学科临床检验诊断学
授予学位硕士
导师姓名颜玉蓉;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类微生物学检验;
关键词
核酸检测; 生物传感器; 沙门氏菌;

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