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【6h】

肺内上皮-间质转化机制在支气管肺发育不良中的作用研究

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摘要

第一部分：高氧及TGF-β1对肺泡Ⅱ型细胞上皮间质转化的影响
　　目的：探讨高氧及TGF-β1干预小鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)后，是否发生上皮间质转化(EMT)及其影响。
　　方法：小鼠肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12，随机分为空气暴露组、高氧暴露组、TGF-β1干预空气暴露组、TGF-β1干预高氧暴露组。观察各组6、12、24、48h细胞形态变化。应用细胞免疫荧光双标法及荧光定量PCR法检测各组各时间点肺表面活性物质B(SP-B)及成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)蛋白和mRNA的表达情况。
　　结果：随着高氧及TGF-β1干预时间的延长，AECⅡ逐渐由鹅卵石样变成纺锤体形状，获得成纤维细胞样外观。同时，AECⅡ特异性标记SP-B表达逐渐减弱，成纤维细胞特异性标记FSP1表达逐渐增强，24h时两者时可见明显的共表达。高氧暴露组、TGF-β1干预空气暴露组及TGF-β1干预高氧暴露组24、48h SP-B mRNA表达较同时间空气暴露组下调，而FSP1 mRNA表达较同时间空气暴露组上调。
　　结论：高氧及TGF-β1均能诱导AECⅡ发生上皮间质转化，且两者对EMT的作用具有时间依赖性。
　　第二部分：肺内上皮-间质转化机制对支气管肺发育不良纤维化影响的实验研究
　　目的：观察高氧暴露新生小鼠上皮细胞标记(肺表面活性物质蛋白B，[SP-B])及成纤维细胞特异性标记(成纤维细胞特异性蛋白，[FSP1])在新生小鼠中的表达情况，探讨肺内上皮-间质转换(Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT)在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)中的作用及机制的研究。
　　方法：新生的1d的C57BL/6小鼠随机分为：BPD组及对照组，应用高浓度氧暴露制作BPD小鼠模型，HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、Masson染色、免疫荧光双标及荧光定量PCR技术，观察高氧暴露后3、7、14、21 d肺组织病理改变及SP-B和FSP1蛋白、mRNA在BPD小鼠中随时间变化的表达情况；BPD小鼠行肺功能检测，评价其生理病理功能的改变。
　　结果：与对照组比较，BPD组高氧暴露后小鼠肺组织逐渐出现发育障碍、胶原沉积明显；SP-B表达于21d时低于对照组(P<0.05)，而FSP1表达相应的增强(P<0.05)，同时第14、21d SP-B及FSP1在肺组织内出现共表达，而对照组相应时间未见SP-B及FSP1共表达存在；肺功能检测显示BPD组与对照组相比呼吸频率(F)及潮气量(TV)均显著降低(P<0.05)。
　　结论：通过EMT机制而来的成纤维细胞是BPD中肺纤维化的重要来源。

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