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前言
Ⅰ文献综述
1.1水稻遗传转化技术的发展
1.2蛋白酶抑制剂基因
1.3标记基因
1.4去除选择标记基因的必要性
1.5去除选择标记基因的策略
1.5.1位点特异性重组系统
1.5.2利用共转化系统删除选择标记基因
1.5.3利用转座子成分删除选择标记基因
1.5.4同源序列重组删除选择标记基因
1.5.5多次自动转化(MAT)载体系统
1.6本文的立题思想
Ⅱ材料-与方法
2.1实验材料
2.1.1供试水稻品种
2.1.2菌株及质粒
2.1.3主要试剂和仪器
2.2实验方法
2.2.1水稻胚性愈伤组织的诱导及继代
2.2.2农杆菌介导的水稻愈伤转化方法
2.2.3抗性愈伤的继代与再生成完整植株
2.2.4水稻叶片DNA提取
2.2.5 PCR检测转基因植株
2.2.6双探针PCR-Southern blot检测
2.2.7转基因植株后代的田间抗虫性调查
2.2.8转基因水稻抗虫性的离体检测方法
2.2.9转基因植株潮霉素抗性测定
Ⅲ结果和分析
3.1双T-DNA载体转化明恢86获得再生植株
3.2转基因T0代植株目的基因与选择标记基因共转化频率检测
3.3共转化植株后代目的基因与选择标记基因的分离检测
3.4 T2代植株检测获得纯合无选择标记的转sck基因株系
3.5 T3代植株检测获得纯合无选择标记的转sck基因植株
3.6转sck基因水稻的抗虫性分析
Ⅳ讨论
4.1双T-DNA共转化获得无选择标记的抗虫转基因籼稻是十分可行的
4.2无选择标记的转基因植株在杂交育种中的应用
4.3目的基因与选择标记基因的共转化频率及其在后代植株中的分离
4.4共转化系统去除选择标记基因缺憾与改进策略
4.5双T-DNA系统与去除标记基因的其他方法的比较
参考文献
附件
致谢
