肠球菌心内膜炎抗原efaA在粪肠球菌生物膜形成中的作用

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目的：探讨肠球菌心内膜炎抗原efaA与肠球菌生物膜形成之间的相关性，为深入研究肠球菌生物膜的致病性及耐药性奠定基础。
　　方法：
　　 1.利用普通光学显微镜观察efaA+、efaA-粪肠球菌在玻片上的生物膜形成过程，初步判定肠球菌生物膜形成各阶段的时间点；
　　 2.微量滴定板法比较efaA+、efaA-粪肠球菌的生物膜形成能力：细菌接种至96孔板中，培养不同时间后弃去培养液，结晶紫染色，乙醇-丙酮混合液溶解，酶标仪测定比较不同阶段efaA+、efaA-菌的OD570值；
　　 3.MTT法比较efaA+、efaA-粪肠球菌生物膜的活菌含量：细菌接种至96孔板中，培养不同时间后弃去培养液，MTT孵育后DMSO溶解，酶标仪测定比较不同阶段efaA+、efaA-菌的OD492值；
　　 4.共聚焦激光扫描显微镜观察比较efaA+、efaA-粪肠球菌所形成的生物膜：各菌株在玻片上形成生物膜，AO/EB染色后CLSM观察，比较efaA+、efaA-菌所形成生物膜的厚度及生物膜内层、中层、外层的细菌密度和活菌比例，并做统计学分析。
　　 5. 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR，检测efaA+、efaA-粪肠球菌在细菌培养皿内培养不同时间后所形成生物膜的efaA mRNA的表达，与生物膜的厚度变化进行对比。
　　结果：
　　 1.肠球菌生物膜黏附期为2h，基本形成期为6h，成熟期为24h，播散期为48h。
　　 2.微量滴定板法比较生物膜形成能力，efaA+粪肠球菌在各培养时间点的OD570均大于efaA-菌，即efaA+粪肠球菌的生物膜形成能力比efaA-菌的强；
　　 3.MTT法比较生物膜不同阶段的活菌含量（OD492），efaA+粪肠球菌在各培养时间点的OD492均大于efaA-菌，即efaA+粪肠球菌所形成的生物膜的活菌数比efaA-菌的多；
　　 4.共聚焦激光显微镜观察，efaA+粪肠球菌在不同阶段所形成的生物膜的厚度、细菌密度及活菌比例均比efaA-菌的大；
　　 5. efaA+粪肠球菌efaA mRNA的表达量随培养时间的延长而增加，24h时达最高水平，随后表达量降低，与生物膜平均厚度变化趋势相平行；efaA-粪肠球菌未检测到efaA mRNA表达。
　　结论：肠球菌心内膜炎抗原efaA基因有利于肠球菌的粘附和生物膜形成。

著录项

作者
吴海珍;
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作者单位

福建医科大学;

展开▼
授予单位福建医科大学;
学科病原生物学
授予学位硕士
导师姓名强华;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类其他;
关键词
粪肠球菌; 生物膜; 实时荧光定量PCR;

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