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慢性氟中毒对大鼠脑组织胆碱能毒蕈碱受体表达的影响

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目的：观察慢性氟中毒大鼠及子代大鼠大脑胆碱能毒蕈碱受体(Muscarinic acetylcholine receptors，mAChRs，简称 M受体)mRNA和蛋白表达变化及氧化应激在慢性氟中毒大鼠脑损伤中的作用，探讨其在慢性氟中毒性脑损伤及学习记忆能力降低发生机制中的作用。
　　方法：健康纯系SD成年大鼠90只，体重100-200 g，随机分为3组，每组30只，雌雄各半。包括对照组：自由饮用自来水，含氟量<0.5mg/L；染氟组：饮水中加入氟化钠，使含氟量为50mg/L；染氟-维生素E（Vitamin E，VE）拮抗组：饮水含氟量为50 mg/L，同时按50 mg VE/kg体重灌胃，每天一次，各组大鼠给予标准饲料，含氟量6.2mg/kg，试验期为10个月。选择慢性氟中毒成年大鼠所生仔鼠50只，每组所生新生仔鼠由慢性氟中毒雌鼠母乳喂养，21日龄后各组饲养条件同成鼠，将仔鼠分1、7、14、21及28日龄五个阶段。用Morris水迷宫方法检测各组大鼠及28日龄各组仔鼠行为学变化；观察大鼠氟斑牙发生情况，用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟、骨氟含量；称取脑重；在光镜下观察大鼠大脑组织学形态改变，用尼氏染色观察大鼠脑组织神经细胞内尼氏小体形态改变；用实时荧光定量PCR、蛋白印迹及免疫组化方法分别检测各组大鼠脑组织M1及M3受体mRNA及蛋白水平表达情况；用生物化学方法检测大鼠血清、脑中丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量、超氧化物歧化酶(peroxide dismutase，SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性以及脑组织匀浆中氧自由基(OH-、H2O2、O2·-)水平。
　　结果：染氟成鼠出现不同程度的氟斑牙，尿氟及骨氟含量高于对照组(P<0.01)，脑重低于对照组(P<0.05)；染氟成鼠学习记忆能力均不同程度降低(P<0.05)，光镜下染氟成鼠皮质及海马各区神经元没有明显改变，神经元尼氏小体数量减少，染色变浅；染氟成鼠脑组织M1、M3受体mRNA水平及蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)；染氟大鼠抗氧化水平降低，氧化应激水平升高(P<0.01)，染氟-VE拮抗组较其有所改善。28日龄染氟仔鼠学习记忆能交对照组降低(P<0.05)，脑组织M1、M3受体mRNA水平及蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05）。
　　结论：长期摄入过量氟引起大鼠及子代大鼠脑组织M受体蛋白表达及mRNA水平降低，慢性氟中毒大鼠血清及脑组织氧化应激水平升高，抗氧化能力降低，这些改变可能是氟中毒大鼠学习记忆能力降低的机制。采用抗氧化剂(VE)可起到对慢性氟中毒神经毒性氧化损伤的干预作用。

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