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还原型谷胱甘肽对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(rOGG1)表达的影响

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中文摘要

1前言

2材料方法

2.1实验材料

2.1.1实验动物

2.1.2药品与试剂

2.1.3仪器与设备

2.2实验方法

2.2.1动物分组和模型建立

2.2.2腹腔液体白细胞检测

2.2.3标本的固定、包埋和石蜡切片的制备

2.2.4 HE染色

2.2.5 Masson染色

2.2.6基因组DNA抽提

2.2.7 DNA的酶解

2.2.8 ELISA检测

2.2.9荧光定量PCR

2.2.10统计学处理

3结果

3.1实验动物的转归

3.2腹腔液体白细胞计数

3.3各组大鼠壁层腹膜组织形态学变化(HE染色及Masson染色)

3.4各组大鼠壁层腹膜组织间皮细胞中的DNA8-OHdG检测结果

3.5荧光定量PCR

3.5.1对照组、模型组及治疗组腹膜组织总RNA提取的结果

3.5.2对照组、模型组及治疗组腹膜组织中rOGG1表达

4讨论

5结论

参考文献

英文摘要

致谢

略缩词表

声明

综述: DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶与腹膜纤维化的研究进展

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摘要

目的:本实验通过建立模拟持续性非卧床腹膜透析(CAPD)大鼠模型,观察高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达及其在腹膜慢性炎症发病机制中的可能作用,探讨高糖所致的腹膜氧化损伤是否与8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(rOGG1)修复酶活性下降有关;以及还原型谷胱甘肽对高糖所致的腹膜间皮细胞DNA氧化性损伤的保护机制。
  方法:将30只健康雄性SD大鼠随机分成3组:对照组(n=10,NS):每天1次腹腔注射生理盐水25mL;模型组(n=10,HGC):每天1次腹腔注射4.25%的葡萄糖腹透液25mL+每周1次腹腔注射乳糖酸红霉素6.25万单位;治疗组(n=10,RG)每天1次腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液25mL+还原型谷胱甘肽(Reduced Glutathione)150mg/kg/d+每周1次腹腔注射乳糖酸红霉素6.25万单位。8周后分别处死每组各10只大鼠,取腹膜组织分别行HE及Masson染色病理检查、酶联免疫吸附法(ELISA)测定壁层腹膜间皮细胞8-OHdG水平、实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测壁层腹膜间皮细胞rOGG1的表达。
  结果:①与对照组比较,HE染色时模型组和治疗组可见腹膜间皮细胞变为圆形、柱形,间皮细胞肥大脱落,间皮下结缔组织明显增厚,可见大量血管生成以及纤维素样物质沉积,还可见成纤维细胞及单核巨噬细胞浸润,上述现象在模型组表现尤为明显。②与对照组比较,Masson染色显示有大量的胶原沉积,模型组比治疗组改变更明显。③与对照组比较,模型组腹膜间皮细胞8-OHdG表达明显上调(P<0.05),治疗组低于模型组(P<0.05);④与对照组比较,治疗组腹膜间皮细胞rOGG1表达明显上调(P<0.05),模型组表达低于治疗组(P<0.05)。
  结论:①高糖致大鼠腹膜间皮细胞表达氧化性损伤标记物8-OHdG明显升高,考虑8-OHdG可能与腹膜纤维化的发生有关。②在大鼠无菌性腹膜纤维化模型中,腹膜间皮细胞纤维化时考虑可能与DNA修复酶OGG1mRNA表达下调有关。③还原型谷胱甘肽对大鼠腹膜间皮细胞DNA可能具有保护和修复作用。

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