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香豆素类化合物Apaensin通过激活JNK和p38MAPK信号通路诱导Nur77依赖性细胞凋亡的机制研究及核受体调节剂的高内涵筛选模型的构建

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摘要

第一章 香豆素类衍生物通过p38和JNK通路的激活调控Nur77依赖的细胞凋亡

第一节 前言

1.1 核受体简介

1.2 孤儿核受体Nur77

1.3 p38MAPK信号通路

1.4 JNK信号通路

1.5 香豆素类衍生物

第二节 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

第三节 结果与分析

3.1 香豆素类化合物Apaensin诱导肿瘤细胞凋亡

3.2 JNK和p38MAPK的磷酸化介导Apaensin诱导的肿瘤细胞凋亡

3.3 Apaensin诱导的肿瘤细胞凋亡是Nur77依赖性的

3.4 Nur77的亚细胞定位与Apaemin诱导的肿瘤细胞凋亡

3.5 Apaensin通过激活JNK诱导Nur77磷酸化出核

3.6 Apaensin通过激活p38促进Nur77靶向线粒体

3.7 Apaensin诱导Nur77与Bcl-2共定位及BAX激活

3.8 Apaensin诱导Nur77与Bcl-2相互作用

第四节 讨论

4.1 Apaensin诱导的肿瘤细胞凋亡是Nur77依赖性的

4.2 Apaensin通过Nur77-Bcl-2凋亡信号导致肿瘤细胞死亡

4.3 JNK和p38MAPK的激活在Apaensin通过Nur77-Bcl-2凋亡信号诱导的细胞凋亡中发挥重要的作用

第五节 结论

第二章 核受体调节剂的高内涵筛选模型构建

第一节 前言

1.1 高内涵药物筛选系统简介

1.2 高内涵药物筛选系统的应用

1.3 针对核受体的高内涵药物筛选

第二节 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

第三节 结果与分析

3.1 核受体ERa调节剂筛选模型构建及应用

3.2 核受体Nur77调节剂筛选

第四节 讨论

第五节 结论

参考文献

致谢

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摘要

本文分为两个章节进行探讨。
  第一章主要介绍香豆素类衍生物通过激活p38和JNK通路调控Nur77依赖的细胞凋亡。香豆素化合物是从植物中提取的天然产物,具有包括抗肿瘤效应在内的广泛药理学活性,但这类化合物的抗肿瘤活性作用机制还不太为人所知。在本文中,我们首次发现香豆素类化合物Apaensin可以诱导肿瘤细胞凋亡,这种凋亡效应是通过激活JNK和p38MAPK激酶调控Nur77-Bcl-2凋亡信号通路实现的。我们发现在用JNK和p38抑制剂抑制JNK和p38MAPK的表达后,Apaensin所诱导的肿瘤细胞凋亡效应有所减弱,且用siRNA技术抑制Nur77的表达后也可以削弱肿瘤细胞的凋亡。进一步研究表明,Apaensin激活的JNK可以磷酸化Nur77,促进Nur77出核。尽管Nur77的出核并不需要p38的激活,但是p38的激活促进了Nur77在线粒体上与Bcl-2的相互作用,改变Bcl-2的构像从抑凋亡蛋白变成促凋亡蛋白,从而诱导肿瘤细胞发生凋亡。综上所述,我们发现了香豆素类化合物Apaensin激活JNK和p38MAPK并以一种独特方式诱导肿瘤细胞通过Nur77-Bcl-2凋亡通路走向死亡。
  第二章主要介绍核受体调节剂的高内涵筛选模型的构建。核受体是一种受配体调节的转录因子,在配体的作用下发挥着与细胞的生长、分化、分裂、凋亡等多种生理功能相关的重要作用。因此,开发一种高效率的核受体调节剂的药物筛选模型有助于先导化合物的发现并加速新药的研发。目前,高通量药物筛选技术层出不穷,而高内涵筛选技术是在高通量基础上的进一步发展,该技术可以在细胞水平上进行药物筛选,开启了药物筛选的新局面。本文中,我们初步探索了两个核受体的药物筛选模型。核受体ERα通过与GRα相融合形成一个新的融合蛋白,在配体的调节下可以实现质、核转移,从而实现药物的筛选。先前的研究已经发现核受体Nur77在凋亡因子作用下可以向线粒体定位,通过筛选使Nur77LBD定位到线粒体的化合物,从而实现Nur77调节剂的筛选。综上,我们初步建立了核受体ERα和Nur77的高内涵药物筛选模型,这为我们进一步进行药物筛选及核受体研究奠定基础。

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