溶酶体上的v-ATPase-Ragulator复合体是AMPK和mTORC1共同的激活因子

声明

摘要

第一章．前言

1．1 AMP激活的蛋白质激酶(AMPK)

1．1．1 AMPK简介

1．1．2 AMPK复合体的组成

1．1．3 AMPK的调控

1．1．4 AMPK对代谢的调控

1．2 哺乳动物的雷帕霉素靶体(mTOR)

1．2．1 mTORC1和mTORC2复合体的组成

1．2．2 mTORC1的调控

1．2．3 mTORC1对代谢的调控

1．3 立题背景

第二章．材料和方法

2．1 质粒

2．2 细胞培养

2．2．1 细胞系

2．2．2 瞬时转染和慢病毒的包装

2．2．3 原代肝细胞的分离

2．2．4 免疫荧光染色

2．3 蛋白质相关实验

2．3．1 免疫共沉淀和免疫印迹

2．3．2 重组蛋白的表达

2．3．3 蔗糖梯度分离晚期内吞体／溶酶体

2．3．4 蔗糖梯度分离不溶于去污剂的膜成分(DRM)

2．3．5 Light organelles的分离

2．3．6 体外磷酸化／去磷酸化实验

2．3．7 体外重构实验

2．3．8 核苷酸交换实验

2．4 小鼠相关实验

2．4．1 小鼠运动实验

2．4．2 实时荧光定量PCR

第三章．结果与讨论

3．1 结果

3．1．1 LAMTOR1是—个新的AXIN相互作用蛋白

3．1．2 LAMTOR1肝脏和肌肉特异性敲除小鼠的构建和检验

3．1．3 LAMTOR1敲除的小鼠肝脏或细胞失去了响应饥饿信号引起的AMPK激活的能力

3．1．4 Ragulator作为一个整体参与了AMPK的激活过程

3．1．5 葡萄糖饥饿引起了溶酶体上的Ragulator-AXIN／LKB1-AMPK复合体的形成

3．1．6 溶酶体结构本身是AMPK激活的重要因囊

3．1．7 LAMTOR1的存在降低了激活AMPK所需要的AMP浓度

3．1．8 AXIN对于葡萄糖饥饿状态下LKB1向溶酶体上迁移的过程起到了重要的作用

3．1．9 AMPK和TSC2都和葡萄糖饥饿条件下AXIN-LKB1的溶酶体迁移过程无关

3．1．10 V-ATPase和Ragulator一起促进了AXIN／LKB1向溶酶体迁移

3．1．11 葡萄糖饥饿的条件下AXIN促进了v-ATPase对mTORC1的抑制

3．1．12 AXIN通过抑制了Ragulator的GEF活力

3．2 讨论

参考文献

致谢

图表索引

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