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【6h】

基于绿色荧光蛋白变异型的荧光共振能量转移在应用上的探索性研究

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目录

文摘

英文文摘

前言

一.绿色荧光蛋白应用的物理、化学、生物学基础

二.GFP的各种应用

三.GFP的突变体

四.荧光共振能量传递

1.FRET的发生、应用原理

2.FRET能量供受体对的选择

3.检测方法

4.FRET的生物学应用

5.基于GFPs的FRET的应用前景

五.本文研究的目的、意义

材料和方法

一.仪器

二.材料

三.方法

1.基因克隆

2.蛋白质表达、纯化

3.免疫实验

4.荧光探针标记蛋白

5.细胞分子生物学实验

结果和讨论

一.GFPs之间FRET的验证

1.荧光蛋白能量供受体对的选择

2.荧光蛋白能量供受体对能量传递的体外验证

3.荧光蛋白能量供受体对能量传递的体内检测

二.新型均相免疫检测系统的建立

1.绿色荧光蛋白抗体的均相荧光免疫检测

2.HIV-1抗体的均相荧光免疫检测

三.大肠杆菌双杂合体系统的建立

1.荧光蛋白融合蛋白表达载体的构建

2.HBV CORE蛋白形成多聚体的验证

3.HEV NE2形成二聚体的验证

四.真核细胞双杂合体系统的初步建立

小结与展望

参考文献

致谢

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摘要

绿色荧光蛋白(GreenFluorescentProtein,GFP)的活体表达和检测的优点使得它作为报告基因和标记蛋白得到了广泛的应用.利用我们现有的多种绿色荧光蛋白光谱突变体,我们筛选出合适的FRET能量供受体对,对它们的应用进行了探索性的研究.我们首先检测了现有的荧光蛋白之间的能量转移.该实验室在研究免疫检测用抗原中积累了经验,结合这些经验将基于GFPs的FRET应用于建立新的均相荧光免疫检测系统中,赋予针对特异抗体的抗原以荧光活性,并配对形成能量供受体,就可以通过检测FRET来检测抗体的存在.该文是基于GFP变异型之间的FRET在应用上的探索性研究,将这一技术应用于建立均相荧光免疫系统,实现对抗体的快速检测;应用于构建融合蛋白,也初步实现了对体内的蛋白-蛋白相互作用的检测.材料和方法的改进还将使这一技术发挥出更多的应用价值.

著录项

  • 作者

    谢小燕;

  • 作者单位

    厦门大学;

  • 授予单位 厦门大学;
  • 学科 生物化学与分子生物学
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 夏宁邵;
  • 年度 2001
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类 蛋白质;
  • 关键词

    绿色荧光蛋白; 荧光共振能量转移;

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