结核分枝杆菌去标签Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4基因克隆及表达

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第一部分：结核分枝杆菌去标签Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4基因克隆及表达
　　目的：构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8(HM)原核表达载体，并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达以作为结核亚单位疫苗备选抗原。
　　方法：以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，应用PCR法扩增Mtb8.4(含NdeⅠ和SacⅠ位点)、Hspx(含NdeⅠ和SacⅠ位点)基因，产物分别经NdeⅠ和SacⅠ酶切后与质粒pET30a连接，构建重组质粒pET30a-Mtb8.和pET30a-Hspx，并转化大肠埃希菌DH5α。抽提重组质粒，SacⅠ和HindⅢ分别酶切该重组质粒后与同样酶切的PCR产物Hspx(含SacⅠ和HindⅢ位点)和Mtb8.4(含SacⅠ和HindⅢ点)连接，构建重组质粒pET30a-Mtb8.4-Hspx和pET30a-Hspx-Mtb8.4，即pET30a-MH和pET30a-HM。转化大肠埃希菌BL21(DE3)中，以终浓度为0.5mmoL/L的IPTG诱导蛋白表达，收菌、超声破碎仪破菌、离心、PBS液重悬菌体沉淀物，行SDS-PAGE电泳。
　　结果：去标签MH和HM融合蛋白分子质量为28000，经SDS-PAGE蛋白电泳验证与实测相符。
　　结论：去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM的成功表达，为进一步研究结核亚单位疫苗免疫原性奠定了基础。
　　第二部分：FTY720对肾移植受者治疗的安全性和有效性系统评价
　　目的：评价FTY720对肾移植受者的免疫抑制的有效性和安全性。
　　方法：计算机检索MEDLINE(1966-2010)；EMBASE(1974-2010)；Cochrane Library(2009年第4期)；The National Research Register；中文科技期刊数据库(1989-2010)、中国学术期刊全文数据库(1994-2010)。
　　结果：4个研究共1883个病人符合纳入标准。在6个月和12个月，对比麦考酚酸酯(MMF)加全剂量环孢霉素A(CsA)——(MMF+FDC)，FTY720(5.0mg)加减半剂量的环孢霉素A(CsA)[FTY720(5.0mg)+RDC]急性排斥反应率显著增高[RR=1.45，95％CI(1.17 to1.79)]，而FTY720(2.5mg)加上全剂量CsA[FTY720(2.5mg)+FDC]组无显著变化[P=0.32，P=0.60]。FTY720(2.5mg)+FDC对比MMF+FDC，在死亡率、移植物丢失率和用抗体治疗的急性排斥反应发生率均无显著差别，其可信区间分别为[RR=0.29，95％CI0.04 to2.17]，[RR=1.31，95％CI0.56 to3.08][RR=0.65，95％CI0.27 to1.57]。在药物所致副作用方面，FTY720引起患者病毒感染、心动过缓的发生率比MMF高[RR=0.59，95％CI0.38to0.94]，[RR=3.58，95％CI2.08 to6.24]，但在细菌感染(P=0.43)、巨细胞病毒感染(P=0.44)、泌尿道感染(P=0.92)及视网膜水肿(P=0.26)等方面无显著差别。
　　结论：目前的研究表明FTY720(5.0mg)+RDC致BPAR发生率提高，故不支持CsA减半剂量。而FTY720(2.5mg)+FDC在预防排斥反应、降低死亡率及BPAR发生率和MMF+FDC作用相似。此外，FTY720组对比MMF组更能降低病毒感染的发生率但却使心动过缓的发生率提高，因此在临床选择用药时应注意药物之间的协同搭配，注意个体差异，做到联合、合理用药。

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作者
吴玉敏;
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作者单位

兰州大学;

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授予单位兰州大学;
学科免疫学
授予学位硕士
导师姓名谭继英;
年度 2010
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肾脏手术;
关键词
肾移植; 免疫抑制剂; 结核分枝杆菌; 基因克隆;

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