文摘
英文文摘
第一章 文献综述
1.1 橡胶树形态学及生理学研究
1.2 橡胶树幼态无性系的研究
1.3 橡胶树自根幼态无性系的研究
1.4 表观遗传及DNA甲基化
1.4.1 DNA甲基化的功能
1.4.2 DNA甲基化生物化学
1.4.3 树木生长发育和老化时的DNA甲基化
1.4.4 DNA甲基化对开花和阶段发育的调控
1.4.5 DNA甲基化控制休眠
1.4.6 微繁和体细胞变异
1.4.7 DNA甲基化研究方法
1.5 抑制差减杂交技术
1.5.1 SSH技术原理
1.5.2 SSH的特点
1.6 本研究的目的意义
1.7 技术路线
第二章 橡胶树体细胞胚发生过程中DNA甲基化变化
2.1 植物材料
2.2 质粒及菌种
2.3 试剂
2.4 实验方法
2.4.1 各种组织材料基因组DNA的提取与纯化
2.4.2 甲基化敏感性扩增片段长度多态性(MSAP)分析
2.4.3 预扩增
2.4.4 选择性扩增
2.4.5 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.4.6 银染检测
2.4.7 多态性甲基化片段的回收、测序及分析
2.4.8 目的片段的克隆及其重组子筛选
2.4.9 Southern杂交分析
2.4.10 数据分析
2.5 结果分析
2.5.1 橡胶树体细胞胚发生过程中各组织材料基因组DNA的提取
2.5.2 橡胶树体细胞胚发生过程中各组织材料DNA的双酶切
2.5.3 橡胶树体细胞胚发生过程的组织特异性甲基化分析
2.5.4 甲基化多态性片段的验证
2.5.5 甲基化片段序列分析
2.6 讨论
2.6.1 MSAP方法的可行性
2.6.2 甲基化模式的形成及变化关系
2.6.3 甲基化模式和形态发生
2.6.4 甲基化模式鉴定及组织特异性甲基化序列分析
第三章 橡胶树自根幼态和老态无性系胶乳中基因的差异表达分析
3.1 植物材料
3.2 质粒及菌种
3.3 试剂
3.4 方法
3.4.1 胶乳Total RNA的提取
3.4.2 RNA电泳检测
3.4.3 mRNA的纯化
3.4.4 橡胶树自根幼态无性系和老态无性系胶乳的差减cDNA文库构建
3.4.5 差减文库的构建及重组子的筛选
3.4.6 Reverse Northern Dot-Blot筛选鉴定阳性差异片段
3.4.7 Cdna序列测定与BLAST分析
3.5 结果与分析
3.5.1 橡胶树胶乳Total RNA的提取结果
3.5.2 Rsa I酶切结果
3.5.3 PCR扩增结果分析
3.5.4 差减cDNA文库重组子的筛选
3.5.5 Reverse Northern Dot-Blot鉴定结果
3.5.6 Semi-quantitative RT-PCR分析
3.5.7 Reverse Northern Dot-Blot中部分阳性克隆的测序分析与同源性比较
3.5.8 cDNA的功能分类
3.6 讨论
3.6.1 SSH法构建幼态与老态胶乳差减cDNA文库
3.6.2 基于SSH方法所得结果的可靠性
3.6.3 部分差异基因片段的序列分析及功能预测
第四章 差异片段全长cDNA克隆及其表达分析
4.1 材料及其处理
4.1.1 材料
4.1.2 采样方法
4.2 试剂
4.3 方法
4.3.1 橡胶树胶乳RNA的提取
4.3.2 橡胶树花、愈伤组织、体细胞胚、叶、芽RNA的提取
4.3.3 橡胶树胶乳5'RACE、3'RACE第一链cDNA合成
4.3.4 RACE引物设计
4.3.5 cDNA末端的快速扩增5'端和3'端
4.3.6 RACE产物的克隆及重组子筛选
4.3.7 全长cDNA序列的获得
4.3.8 RT-PCR分析第一链cDNA合成
4.3.9 RT-PCR引物的设计
4.3.10 指数增长期的确定
4.3.11 RT-PCR分析
4.4 结果与讨论
4.4.1 HbHDT1基因的克隆及表达分析
4.4.2 HbSKP1基因的克隆及表达分析
4.4.3 HbCC基因的克隆及表达分析
4.4.4 Hb14-3-3基因的克隆及表达分析
结论
参考文献
致谢
