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养血固肾汤对大鼠骨折愈合影响的实验观察研究

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目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 国内外的研究现状

一、骨折愈合的研究概况

二、电子显微镜的应用

三、骨密度检测设备

第二章 研究实验的背景

第一节 关于养血固肾汤的文献研究

一、药方组成

二、组方治则分析

三、养血固肾汤的现代理论研究

一、有关建立骨折模型的构想

二、有关对照组药物的选择

第三章 养血固肾汤有关生化指标上的观察

第一节 研究背景

一、实验材料

二、实验方法

三、统计分析

四、实验结果

第三节 讨论

第四章 养血固肾汤有关组织病理学上的观察

第一节 研究背景

第二节 材料及方法

—、实验材料

二、检查内容与方法

三、统计学方法

四、检查结果

第三节 讨论

第五章 养血固肾汤有关Micro-CT的观察

第一节 研究背景

第二节 Micro-CT的优势

第三节 材料及方法

一、实验方法

二、实验方法

三、Micro-CT检测

四、统计分析

五、实验结果

第四节 讨论

第六章 综合讨论

第一节 个别检查重要表现

一、促进成骨细胞活跃

二、组织病理学反映能促进骨折愈合

三、Micro-Ct结果反映能增加骨结构的强度

第二节 综合分析

一、对破骨细胞有一定的抑制作用

二、有关Micro-Ct骨参数的结果与组织病理学结合分析

第三节 本课题创新点

第四节 问题与展望

第七章 结论

参考文献

附录

致谢

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摘要

目的:
  骨折是临床上常见的疾病之一,主要分为骨小梁中断裂和骨皮质断裂,而当中最棘手的问题是骨折不愈合或延迟愈合。骨折的愈合过程是一个极其复杂的过程,当中牵涉组织学、生物学、内分泌学及生物力学等知识。影响骨折愈合的因素众多,包括全身因素和局部因素、医源性因素、骨生长因子、微量元素、生物力学因素。对于如何促进骨折的愈合过程、恢复骨的正常功能及结构一直是医学界研究的焦点及热点。学者们经过不同的研究及实验方法,从多角色去探讨,才有现今对骨折愈合过程的认识。
  现行的治疗骨折的方法很多,而且部份疗效显着,但亦有好多的不足,在这样立足点上,祖国医治骨折病症的长远经验及技术累积可以好好发挥作用,因其有简单方便、安全有效、毒副作用低及成本低廉等优点,一直被医生及患者认可。
  本课题在祖国医学理论指导下,展开“养血固肾汤”对骨折愈合过程的促进作用效果的研究,尝试从多角度着手,透过不同层面的观察,剖析养血固肾汤对骨折愈合的干涉作用及解释当中的机制。
  基于文献记录上,有关观察“养血固肾汤”对骨折愈合过程的促进作用效应研究目前未见报导。本文起着先导的作用,于不同研究层面上,对“养血固肾汤”进行观察,从而提高对“养血固肾汤”于骨折愈合过程的理解,以利指导临床工作,为推动中医药的普及使用出一分绵力。
  方法:
  动物模型准备工作:80只SD雄性大鼠,开始体重为168.5~237.2g,四肢无畸形,活动自如,生命体征平稳,饮食正常,无传染病,整个饲养及实验过程在SPF级环境内进行。到体重合适时实验开始,于大鼠左胫骨中段行开放性骨折模型造模,行克氏针骨髓腔逆行内固定,缝合切口,不包扎。手术后挑选造模成功的72只大鼠,按体重随机分为空白组、对照组及养血固肾汤剂组,每组24只。空白组、对照组及养血固肾汤剂组分别给予纯净水、恒古骨伤愈合剂及养血固肾汤按体重灌胃给药。
  第一部份生化指标观察:术后d7,d14,d24及d35各组按之前随机编定的数字,各解剖6只动物,采取血液样本。用全自动生化检测仪器,检查血钙、血磷及ALP三项生化指标。第二部份组织病理学观察:于前述每段时间随机解剖的6只动物中,处死后取左下肢胫骨连股骨中下段的部分作成标本,作组织病理学分析;根据组织病理学指导下,检测组织标本,用光学显微镜随性取3个视野点,观察骨小梁面积百分数、成骨细胞指数及破骨细胞指数。第三部份微计算器断层扫描技术(Micro-CT)观察:于前述每段时间随机解剖的6只动物中,随机取当中3只动物,取左下肢胫骨连股骨中下段的部分作成标本,送往检测中进行Micro-Ct检测。使用Micro-CT检测骨折部位,选取感兴建区(region of interest,ROD),利用软件重塑图像,透过分析图像及系统检测,采集BMD,BV/TV,TV,Tb.Th,Tb.Sp,Tb.N及SMI等多项骨参数。
  统计学分析:所有数据采用((x)±s)表示,应用SPSS21.0软件进行统计分析;计量资料数据方差齐,或数据经转换后方差齐,则采用单因素方差分析;若数据经转换后方差仍不齐,采用秩和检验进行统计分析。
  成果:
  于生化指标上,养血固肾汤剂组实验早期相比空白组及对照组明显增加血磷值(P<0.05),以及增加钙磷乘积值(P<0.01),促进钙盐沉积,血钙值伴随减低(P>0.05),从而令到血液中的钙离子进入基质,由于成骨细胞的作用,使钙及磷积聚及结合,形成钙盐沉积,加速骨痂的建立及重塑,有利于骨折愈合的发展。而当中血清的钙离子浓度亦会相应降低。于组织病理学上,d7,相比空白组,养血固肾汤剂组在骨痂出现的基础上,更早出现软骨痂及骨小梁的排列,个别动物可见机化的血肿,骨痂内可见大量软骨细胞及稀疏的骨小梁。d14,相比空白组,养血固肾汤剂组动物骨折处可见纤维性骨痂及大量软骨、致密的骨小梁,于数量上比较多。d24,相比空白组,养血固肾汤剂组大部分动物的骨小梁及骨痂转变加快,表现为骨小梁明显增粗,外骨痂开始形成板状骨,骨痂内可见少量软骨细胞,个别动物骨髓腔再通几方面。d35,空白组与养血固肾汤剂组部分动物俱见外骨痂形成板状骨,骨髓腔内可见骨髓细胞,部分动物骨痂内可见少量软骨细胞和增粗的骨小梁。反映养血固肾汤能促进骨痂的产生时间,而且对骨痂其后的改变,如软骨性骨痂及硬骨痂的产生时间都有促进作用;于骨小梁结构方面同样有作用,表现为催使骨小梁的结构提早出现及结构稠密度增加两方面,更能促进骨折愈合。于Micro-CT采集的骨参数结果中,有关BMD,BV/TV,TV,Tb.Th,Tb.Sp,Tb.N及SMI各组间未见统计学差异。d35,相比空白组,SMI数值明显接近0,代表骨小梁多呈板状骨,亦代表骨小梁的强度相比较高,对比Micro CT数据所整合的平面图像,相比空白组,养血固肾汤能加促骨髓腔再通的时间,于骨小梁结构方面同样有作用,表现为催使骨小梁的结构提早出现及结构稠密度增加两方面,更能促进骨折愈合。
  结论:
  1.养血固肾汤能够升高血磷,使钙磷乘积高峰显着升高,促进钙盐沉积,提高骨折愈合中血清碱性磷酸酶的活性,增强体内成骨细胞的活动,促进骨折愈合。
  2.养血固肾汤能促进骨痂的产生时间,而且对骨痂其后的改变,如软骨性骨痂及硬骨痂的产生时间都有促进作用;于骨小梁结构方面同样有作用,表现为催使骨小梁的结构产生及结构稠密度增加两方面,促进骨折愈合。
  3.养血固肾汤于Micro-CT采集的骨参数及所整合的平面图像中,反映能加促骨髓腔再通的时间,致密性骨小梁及骨性骨痂的出现提早。

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