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树豆叶药用提取物的急性和亚急性毒性及质控方法研究

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论文说明

摘要

引言

第一章 文献研究

1.1 树豆的药理学研究

1.1.1 治疗股骨头坏死和抗骨质疏松

1.1.2 降血糖和降血脂

1.1.3 抗菌消炎作用

1.1.4 抗病毒作用

1.1.5 抗肿瘤作用

1.1.6 抗氧化作用

1.1.7 抗疟作用

1.1.8 其他作用

1.2 以树豆为来源的食品

1.2.1 糕饼豆沙类

1.2.2 酒类

1.2.3 茶类

1.2.4 其他

1.3 以树豆为来源的药品

1.3.1 通络生骨胶囊

1.3.2 股骨康

1.3.3 复方树豆叶中药制剂

1.3.4 用于治疗脚气的药物

1.4 毒理学常见实验分类

1.4.1 急性毒性试验

1.4.2 28天亚急性毒性试验

1.4.3 长期毒性试验

第二章 树豆叶药用提取物的质量分析研究

2.1 试药

2.1.1 药材与样品

2.1.2 提取物的制备方法

2.2 主要仪器

2.3 主要试剂与对照品

2.4 树豆叶水溶性提取物的含量测定

2.4.1 对照品溶液的配制

2.4.2 不同浓度混标溶液的配制

2.4.3 供试品溶液的配制

2.4.4 含量测定的色谱条件

2.4.5 线性关系考察

2.4.6 精密度试验

2.4.7 稳定性试验

2.4.8 重复佳试验

2.4.9 加样回收率试验

2.4.10 样品测定

2.4.11 讨论

2.5 树豆叶脂溶性提取物的含量测定

2.5.1 对照品溶液的配制

2.5.2 不同浓度混标溶液的配制

2.5.3 供试品溶液的配制

2.5.4 含量测定的色谱条件

2.5.5 线性关系的考察

2.5.6 精密度试验

2.5.7 稳定性试验

2.5.8 重复性试验

2.5.9 加样回收率试验

2.5.10 样品测定

2.5.11 讨论

2.6 树豆叶药用提取物质量分析小结

第三章 树豆叶药用提取物的急性毒性研究

3.1 材料

3.1.1 药物与试剂

3.1.2 动物

3.1.3 仪器

3.2 WEC、EEC、DEC和BEC的急性毒性实验

3.2.1 预实验

3.2.2 树豆叶水提取物、乙醇提取物、正丁醇提取物和二氯甲烷提取物对小鼠的急性毒性MTD正式试验

3.2.3 统计学处理

3.3 树豆叶不同提取物对小鼠的急性毒性实验结果

3.3.1 一般状态观察结果

3.3.2 病理结果(肉眼观察)

3.4 讨论

第四章 树豆叶药用提取物的亚急性毒性研究

4.1 材料

4.1.1 药物

4.1.2 试剂

4.1.3 动物

4.1.4 仪器

4.2 树豆叶WFC和EEC的亚急性毒性实验方法

4.2.1 方法与给药

4.2.2 样本采集与处理

4.2.3 统计学处理

4.3 树豆叶WFC和FFC的亚急性毒性试验结果

4.3.1 一般状态观察结果

4.3.2 对大鼠体重的影响

4.3.3 对大鼠脏器系数的影响

4.3.4 对大鼠血常规和血清生化的影响

4.3.5 对大鼠病理学的影响

4.4 讨论

总结

参考文献

附录

在校期间发表文章情况

致谢

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摘要

树豆[Cajanus cajan(Linn.) Millsp.]是一种豆科植物,分布于亚洲、非洲和美洲等地区,其叶被广泛用作饲料和传统药物。然而,关于树豆叶及其提取物的系统的安全性评价尚未见报道。
  目的:
  1、对树豆叶水提取物(WEC)、90%乙醇提取物(EEC),以及EEC的二氯甲烷可溶部位(DEC)和正丁醇可溶部位(BEC)中的活性成分进行含量测定,为树豆叶药用提取物的毒理学研究对象提供质量保障。
  2、研究口服WEC、EEC、DEC和BEC对昆明小鼠的急性毒性;口服WEC和EEC对SD大鼠的亚急性毒性;为树豆叶特别是其药用提取物的开发提供安全性评价依据。
  方法:
  1、质量分析试验采用高效液相色谱法对各提取物中的特征性黄酮和蔗类成分进行质量分析。对WEC和BEC中的荭草素(orientin)、牡荆苷(vitexin)、染料木苷(genistein)以及EEC和DEC中的球松素(pinostrobin)、木豆素C(longistyline C)、木豆素A(longistyline A)的含量进行测定。
  2、毒理学试验急性毒性试验:采用最大耐受量法,单次口服WEC、EEC、BEC和DEC最大剂量后,连续14天观察小鼠的死亡率、体重变化、一般状态和毒性反应,求得最大耐受量(MTD)。
  亚急性毒性试验:水提取物组(WEC)和乙醇提取物(EEC)均以6.0、3.0、1.5g·kg-1不同剂量给予SD大鼠连续灌服4周。在给药4周和停药2周后分别观察大鼠的体重、临床体征、血液学和生化指标、相对脏器重量和组织病理学检查结果。
  结果:
  1、HPLC检测结果表明,WEC和BEC的特征性成分染料木苷、牡荆苷和荭草素的含量范围分别为0.25%-0.78%(WEC)和0.51%-2.98%(BEC);EEC和DEC特征性成分木豆素A、木豆素C和球松素的含量范围分别为0.22%-1.06%(EEC)和1.80%-7.34%(DEC)。
  2、在急性毒性试验中,未观察到动物死亡和一般行为、呼吸模式、自主运动、反射、毛发等异常变化。WEC、EEC、BEC和DEC的MTD分别为15.0、15.0、15.0、11.3g·kg-1(折算成生药分别为115.4g·kg-1、65.2g·kg-1、862.1g·kg-1、283.2g·kg-1)。急性和亚急性毒性试验所有组动物的体重呈增长趋势,在亚急性毒性研究中,试验组动物的血液学、生化参数和病理组织学检查结果与对照组比较无明显差异,然而,WEC中剂量组和EEC高、中剂量组雌性大鼠的肾体系数高于对照组(P<0.05);与对照组比较,EEC三个剂量组雄性大鼠的睾丸和附睾体系数有着显著降低(P<0.01或P<0.001),但在2周停药期结束后,以上异常变化均恢复至正常水平,且未观察到血液学、血清生化和病理组织学的异常变化。
  结论:
  树豆叶水提取物、乙醇提取物、二氯甲烷提取物和正丁醇提取物在本实验条件下未显示出急性毒性;在亚急性毒性试验剂量条件下,WEC和EEC口服给药4周对SD大鼠的一般行为、体重、摄食量、血液学、血液生化指标和病理学检查结果未造成明显影响。WEC和EEC组雌性大鼠肾体系数出现的增加及EEC组雄性大鼠睾丸和附睾体系数的显著降低在停药期均能恢复正常,未伴随相关血液学和病理学的异常变化。表明WEC和EEC在本实验条件下对SD大鼠无明显亚急性毒性。

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