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大黄素对金黄色葡萄球菌抑制作用的蛋白质组学研研究

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目录

声明

摘要

引言

第一章 研究背景

1 金黄色葡萄球菌致病因子研究进展

1.1 金葡菌溶血素的研究

1.2 金葡菌肠毒素的研究

1.3 金葡菌粘附素的研究

1.4 金葡菌剥脱毒素的研究

2 金黄色葡萄球菌耐药机制研究进展

2.1 氨基糖苷类抗生素耐药机制

2.2 β-内酰胺类耐药机制

2.3 氟喹诺酮类抗菌药耐药机制

2.4 糖肽类抗生素耐药机制

3 中药抑菌作用研究进展

4 大黄素抗菌作用及其作用机制研究

4.1 抗微生物作用

4.2 大黄素抗菌作用机制研究进展

5.蛋白质组学研究进展

5.1 蛋白质组的概念

5.2 蛋白质组学的研究内容和技术平台

5.3 iTRAQ相对定量技术为蛋白质组研究提供了更为便捷的手段

6 本研究的工作思路、主要研究方法和预期成果

第二章 体外抑菌实验研究

1 实验仪器与材料

1.1 仪器设备

1.2 药品与试剂

1.3 实验菌株

1.4 实验用试剂和缓冲液配方

2 实验方法

2.1 药物抗菌活性评价

2.2 大黄素对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响

2.3 大黄素对金葡茵蛋白质作用的SDS-PAGE分析

3 结果

3.1 药物抗菌活性评价

3.2 大黄素对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响

3.3 大黄素对金黄色葡萄球菌蛋白质表达的影响

4 讨论

5 小结

第三章 大黄素抗金葡菌作用的蛋白质组学分析

1 材料和仪器

1.1 实验材料

1.2 仪器与设备

1.3 实验菌株

2.实验方法

2.1 菌体制备

2.2 样品制备

2.3 iTRAQ标记

2.4 组分收集

2.5 液相质谱分析

2.6 数据处理

3.结果与分析

3.1 质谱数据有效性分析

3.2 MRSA对照组与MSSA对照组差异蛋白分析

3.3 MRSA药物组与MRSA对照组差异蛋白分析

3.4 MSSA药物组与MSSA对照组差异蛋白分析

4.讨论

5.小结

第四章 总结与展望

1 结论

2 展望

附录

附录1 MRSA对照组vs MSSA对照组差异蛋白KEGG代谢通路显著性富集分析

附录2 MRSA药物组vs MRSA对照组差异蛋白KEGG代谢通路显著性富集分析

附录3 MSSA药物组vs MSSA对照组差异蛋白KEGG代谢通路显著性富集分析

参考文献

研究生在学期间发表论文情况

致谢

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摘要

目的: 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,金葡菌)是一种严重的条件致病菌。临床分离的耐甲氧西林金葡菌具有多重耐药性。本研究的主要目的是确证大黄素对金葡菌的抑制效果,并进一步利用比较蛋白质组学方法探讨大黄素对金葡菌敏感菌株(methicillin-sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)和多重耐药菌株(Multi-drugresistant Staphylococcus aureus,MRSA)的作用机制。 方法: ①采用体外抑菌实验方法研究大黄素对临床分离的多种耐药金葡菌(编号MRSA133630)的最小抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration,MIC),在大黄素0.25×MIC影响下,连续24小时测金黄色葡萄球菌的OD595值,描绘细菌生长曲线,对金葡菌的蛋白质表达谱进行SDS-PAGE分析;②应用同位素标记相对和绝对定量与高效液相色谱及质谱联用(iTRAQ-LC-MS/MS)的高通量蛋白质生物质谱技术研究大黄素作用后金葡菌蛋白谱表达的改变,结合生物信息学方法,从差异表达蛋白中寻找大黄素可能影响的代谢通路或靶点。 结果: ①大黄素对金黄色葡萄球菌有良好抑菌作用,其对MSSA ATCC29213和MRSA133630的MIC分别为0.19μg/mL、15.98μg/mL;②大黄素抑制MSSA和MRSA的生长,并影响细菌蛋白质的表达;③MRSA对照组和MSSA对照组相比,表达量变化1.5倍以上的蛋白共349个,其中上调蛋白162个,下调蛋白187个,差异表达(上下调1.5倍,且P<0.05)的蛋白107个,主要分布在糖代谢/糖异生、丙酮酸代谢,毒力蛋白表达以及ABC转运系统等途径;④MSSA药物组和MSSA对照组比较,表达量变化1.5倍以上的蛋白共200个,上调69个,下调131个,差异表达蛋白49个,主要是丙酮酸代谢途径的催化酶或关键酶,部分是金葡菌毒力因子和氧化应激系统等相关蛋白;⑤MRSA药物组和MRSA对照组比较,表达量变化1.5倍以上的蛋白共158个,上调58个,下调100个;差异表达的蛋白32个,主要涉及糖代谢、蛋白质降解、氧化应激以及毒力因子表达等多个途径。 结论: 本课题通过体外抗菌实验发现大黄素对金葡菌抑菌效果显著。 MSSA和MRSA的蛋白质谱存在显著差异。MRSA在糖代谢、毒力因子表达和转运系统方面有别于MSSA,说明MRSA的多重耐药是多个因素综合的结果。lip、sspB、atl、CapG和PrsA受大黄素影响表达显著下调,可能是MRSA的耐药靶点;组氨酸激酶可能是大黄素抗金葡菌的作用靶点,但要确认尚需要进一步的实验支持。

著录项

  • 作者

    彭苑霞;

  • 作者单位

    广州中医药大学;

  • 授予单位 广州中医药大学;
  • 学科 药物分析学
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 徐晖;
  • 年度 2014
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类
  • 关键词

    大黄素; 金黄色葡萄球菌; 抑制作用;

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