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针刺对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质NGF和Bax影响的研究

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引言

第1章 文献研究

1.1.1 现代医学对HIE病因病机认识

1.1.2 中医对HIE病因病机的认识

1.2.1 西医治疗

1.2.2 中医治疗

1.3 展望

第2章 实验研究

2.1.2 方法

2.1.3 结果

2.1.4 讨论

2.2 实验二 针刺对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质NGF和Bax的影响

2.2.2 方法

2.2.3 結果

2.2.4 讨论

结论

一、文献研究

二、实验研究

结语

创新点

不足之处

参考文献

附录

致谢

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摘要

目的：
　　观察针刺靳三针头穴对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质中与神经细胞凋亡相关的NGF和Bax的影响，探讨早期针刺靳三针头穴对治疗小儿脑瘫的相关机制，为临床提供客观科学依据。
　　方法：
　　本实验分两个部分，首先模拟宫内窘迫（窒息）建立HIBD大鼠模型。将已明确预产期的妊娠雌性SD大鼠42只，分为正常组6只，假手术组3只，造模组16只，代乳鼠组19只。对造模组行延迟剖宫产术，用血管钳夹闭双侧上下子宫角血管，缺氧缺血5min；假手术组行剖宫产，不夹闭子宫角血管；正常组自然分娩。通过比较模型组和对照组新生大鼠出生时的表现、第2天生理反射和21d脑组织HE染色结果来鉴定造模是否成功。
　　随后利用上一个实验造模成功的新生HIBD大鼠完成靳三针头穴对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质NGF和Bax影响的研究。将新生14d的SD大鼠按上一个实验的组别进行随机挑选，分为正常组、造模组、针刺1组、针刺2组，其中针刺1组和针刺2组的新生大鼠来自上个实验的造模组。对针刺1组、针刺2组行针刺治疗，每天针刺靳三针穴组中的“脑三针”、“颞三针”（双侧）、“智三针”。各组别大鼠按实验要求分别于出生后21天、28天、35天、42天、49天断头取脑组织检验，通过免疫组化检测各组脑组织中NGF和Bax的表达。
　　结果：
　　实验一：
　　（1）新生大鼠21d死亡率：正常组5.13%，假手术组6.82%，造模组14.66%
　　（2）出生时表现：正常组：出生即全身呈现较深的粉红色，在雌鼠的舔舐下可扭动身体、挥舞四肢、发出叫声，并可迅速吃乳。假手术组和造模组：新生大鼠甫从子宫中取出时，均全身青紫或苍白，四肢伸展，没有呼吸，心跳过速，对触觉刺激无反应。
　　（3）第2天翻正反射各组新生大鼠第二天均可完成翻正反射，但造模组翻正的最短时间长于正常组和假手术组（P<0.05），成功的次数也少于正常组和假手术组（P<0.05）。
　　（4）21d脑组织HE染色结果正常组：神经元的6层结构完整。神经元圆形或锥形，细胞质内见嗜碱性均匀分布的尼氏体，细胞核位于胞体中央，核膜明显。假手术组：神经元的6层结构基本完整，局灶区域可见3层（外锥体细胞层）锥体细胞胞浆红染，胞核浓缩深染，结构消失。模型组：大脑皮质的3层和5层（外锥体细胞层和内锥体细胞层）锥体细胞数量减少，细胞体积缩小，变成三角形，胞浆呈均匀的嗜伊红染色，胞核浓缩深染，结构消失。
　　实验二：
　　（1）脑组织中NGF的表达：
　　21d针刺1组分别与正常组和模型组有显著差异（P<0.05），正常组和模型组有显著差异（P<0.05），28d、35d、42d、49d针刺组与正常组和模型组差别无统计学意义（P>0.05）。
　　针刺1组和针刺2组在分别针刺7d、14d、21d后的NGF数值有显著性差异（P<0.05）。
　　（2）脑组织中Bax的表达：
　　42d针刺2组与正常组差别无统计学意义（P>0.05）；与模型组有显著性差异（P<0.05），正常组与模型组有显著差异（P<0.05）。
　　针刺1组和针刺2组在针刺7d后Bax数值有显著性差异（P<0.05）。在针刺14d、21d差别无统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　1.本研究采用延迟剖宫产术，以止血钳钳夹子宫角血管的方法，阻断胎鼠宫内血流，造成胎鼠宫内窒息（窘迫），从而制备HIBD新生大鼠模型，在操作上更为简便，并将缺氧缺血的时间确定为5min。
　　2.缺氧缺血性脑损伤与参与大鼠大脑皮质中的NGF和Bax表达密切相关,存在不同的表达时间。早期针刺干预对脑瘫幼鼠脑组织中的NGF和Bax表达具有良性调节作用，对NGF的表达起到改善的作用，对Bax的表达确实起到了抑制作用。
　　3.针刺治疗的介入时间越早，结果越理想。

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