畜产品中β-兴奋剂ELISA快速检测方法的建立与检测

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β-兴奋剂（β-adrenergic a go nist）是苯乙醇胺的一类衍生物。对动物体具有促进肌肉组织生长，影响脂肪含量，能提高动物组织的瘦肉率和增加瘦肉的产量。高残留的β-兴奋剂，会产生极强的毒副作用，甚至危及生命。现在人工合成的β-兴奋剂有十余种，克伦特罗，沙丁胺醇，莱克多巴胺是目前国内外主要常用的β-兴奋剂。目前，欧美等国家都限制了其在畜牧生产上的使用，我国各部门包括卫生部，农业部，国家药品监督管理局共同发布的公告中，都明确规定和禁止了β-兴奋剂药物在饲料和动物饮用水中的使用。因此，开发针对动物源性食品中的β-兴奋剂的快速检测方法，对保障食品安全具有重要意义。
　　为了建立快速、灵敏、低成本、高通量的β-兴奋剂残留免疫学研究分析方法，本研究在分析β-兴奋剂免疫学特性的基础上，利用β-兴奋剂的单克隆抗体，建立了β-兴奋剂的酶联免疫分析方法以及应用。主要成果如下：
　　（1）β-兴奋剂间接ELIS A分析方法的建立
　　分别对包被原的浓度、抗体稀释的倍数、抗体稀释液的选择、抗体反应的时间、pH值等参数进行优化，建立了间接ELIS A检测方法。最终确定包被抗原浓度为250μg/L；抗体稀释浓度是127μg/L；离子浓度为0.2 mo l/L的P B缓冲液，最佳 pH值为7.2；一抗反应时间为30 min。对猪尿液的添加回收率为80.0-104.0%，该方法灵敏度高、回收率好、假阳性率少，测定结果准确。
　　（2）β-兴奋剂试剂盒的制备
　　采用间接竞争ELISA法构建β-兴奋剂试剂盒。通过棋盘法和单因素实验优化条件建立标准曲线，检测半抑制浓度克伦特罗IC50为1.18μg/L，沙丁胺醇IC50为1.42μg/L。克伦特罗线性范围IC20-IC80为：0.31-4.52μg/L，检测限为0.05μg/L；沙丁胺醇线性范围IC20-IC80为：0.70-5.32μg/L，检测限为0.10μg/L，检测范围为0.05-4.5μg/L；与克伦特罗（CLB）的交叉率是100%，与沙丁胺醇（SAL）的交叉率是83.1%，与马布特罗（MBL）的交叉率是42%，与溴布特罗（BBL）的交叉率是25.82%，与氯丙那林（CPL）的交叉率是9.16%，与西马特罗（CML）的交叉率是5.41%，与莱克多巴胺（RAC）的交叉率少于5%；试剂盒在37℃存放6天，在4℃存放一年以上，试剂盒的灵敏度变化较小，稳定性较好；批间和批内的变异系数均<15%，方法精密度高；样品的添加回收率在80.0%-104.0%之间，方法准确度高，样品假阳性少。将试剂盒产品应用于实际样品检测，效果良好。

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作者
林晓慧;
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作者单位

华南农业大学;

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授予单位华南农业大学;
学科食品工程
授予学位硕士
导师姓名杨金易,刘辉;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 TS207.53;
关键词
动物源性食品; β-兴奋剂; 快速检测; 食品安全;

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