酸酐修饰卵清蛋白作为候选杀微生物剂预防HIV性传播研究

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前言

第1章 酸酐修饰蛋白构效关系研究

1 材料

2 实验方法

2.1 采用化学修饰方法,制备5种不同来源的酸酐修饰蛋白

2.2 酸酐修饰蛋白浓度测定

2.3 5种HP修饰蛋白的抗HIV-1活性评价

2.4 酸酐修饰蛋白中碱性氨基酸残基被修饰比率测定

2.5 制备3种不同酸酐修饰的卵清蛋白

2.6 酸酐修饰卵清蛋白抗病毒活性与蛋白末端氨基酸被修饰比率间的关系

2.7 统计方法

3 实验结果

3.1 5种酸酐修饰蛋白具有不同的抗HIV-1活性,其中抗病毒活性较高且蛋白价格低廉的为酸酐修饰的卵清蛋白HP-OVA

3.2 含苯环及烯键的酸酐修饰卵清蛋白具较强抗HIV-1活性,其中HP-OVA抗病毒活性最强

3.3 HP-OVA中赖氨酸及精氨酸残基被HP修饰比率与其抗病毒活性密切相关

第2章 HP-OVA抗HIV作用机制研究

1 材料

2 实验方法

2.1 HP-OVA抑制HIV-1,HIV-2,SHIV,SIV和HSV-2的活性检测

2.2 HP-OVA对HIV-1诱导的细胞-细胞融合的影响

2.3 HP-OVA抑制感染HIV-1 R5病毒的PBMCs传播到CEMx174 5.25M7细胞

2.4 HP-OVA对病毒-细胞融合活性影响

2.5 HP-OVA抑制HIV-1进入靶细胞的确证(Time-of-addition实验)

2.6 酸酐修饰蛋白作用靶点的确定

2.7 统计方法

3 实验结果

3.1 HP-OVA可有效抑制HIV-1,HIV-2,SHIV,SIV和HSV-2感染

3.2 HP-OVA抑制HIV-1诱导的细胞-细胞融合

3.3 HP-OVA抑制感染HIV-1BaL病毒的PBMCs传播到CEMx174 5.25M7细胞

3.4 HP-OVA抑制病毒-细胞融合

3.5 HP-OVA抑制HIV-1进入靶细胞

3.6 酸酐修饰蛋白HP-OVA作用靶点的研究

第3章 HP-OVA体外安全性及稳定性评估

1 材料

2 实验方法

2.1 HP-OVA体外毒性研究

2.2 HP-OVA对阴道对正常菌群特别是乳酸杆菌的影响

2.3 HP-OVA对免疫细胞功能的影响

2.4 胰蛋白酶对HP-OVA稳定性的影响

2.5 人正常精液SF及阴道模拟液VFS对HP-OVA抗HIV-1病毒活性影响

2.6 温度对HP-OVA的稳定性研究

2.7 统计方法

3 实验结果

3.1 HP-OVA对细胞体外毒性研究

3.2 HP-OVA对阴道正常菌群乳酸杆菌生长无影响

3.3 HP-OVA对淋巴细胞功能无明显影响

3.4 胰蛋白酶对HP-OVA稳定性的影响

3.5 人精液SF及阴道模拟液VFS对HP-OVA抗HIV-1病毒活性无影响

3.6 不同温度下HP-OVA保持稳定

第4章 HP-OVA与特异性杀微生物剂合用研究

1 材料

2 实验方法

2.1 检测HP-OVA及其他抗病毒药物抗HIV-1ⅢB及各药物耐药株AZT-R、A17R及NL4-3V38E/N42S的活性

2.2 检测HP-OVA及其他抗病毒药物抑制HIV-1BaL的活性

2.3 检测HP-OVA及其他抗病毒药物联合应用时抗病毒的活性

2.4 统计方法

3 实验结果

3.1 HP-OVA与6种HIV进入抑制剂均能产生协同抗HIV-1作用

3.2 HP-OVA与3种HIV逆转录酶抑制剂能产生协同抗HIV-1的作用

3.3 HP-OVA能有效抑制核苷逆转录酶抑制剂耐受病毒株AZT-R、非核苷逆转录酶抑制剂耐受病毒株A17R及T20耐受株NL4-3V38E/N42S的感染

讨论

结论

参考文献

附录 缩写词中英文对照表

成果

致谢

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