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蛋白激酶C亚型在人视网膜内皮细胞中的表达及灯盏花素对其转位激活的抑制作用研究

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第一章 前 言

1.1糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)

1.2蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)

1.3灯盏花素(scutellarein)

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 主要试剂

2.3主要实验仪器

2.4试剂配制

2.5实验方法

第三章 实验结果

3.1 HREC细胞传代生长

3.2 PKC亚型在正常培养人视网膜内皮细胞中的表达

3.3灯盏花素对PKC亚型转位激活的抑制作用

第四章 讨论

4.1HREC中表达PKCα,PKCβⅠ,PKCβⅡ,PKCδ和PKCε

4.2灯盏花素抑制PMA诱导的PKCβⅡ和δ亚型转位激活

创新与意义

参考文献

致 谢

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摘要

研究目的: 检测人视网膜内皮细胞(human retinal endothelial cells,HREC)中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)六种亚型(α、δ、ε、ζ、βⅠ、βⅡ)的表达,观察灯盏花素干预对PMA诱导的PKC各亚型转位激活的作用,为探索PKC亚型在HREC生理功能及病理作用机制中的调控及灯盏花素防治糖尿病视网膜病变的药理学机制提供实验基础。 研究方法: 采用免疫印迹(Western blotting)方法检测正常培养条件下3-6代HREC中PKC六种亚型(α、δ、ε、ζ、βⅠ、βⅡ)的表达;灯盏花素干预及PMA预处理HREC或鼠脑组织后,运用梯度离心法分离全细胞或组织蛋白为细胞浆、细胞膜和细胞颗粒三种组分,采用免疫印迹方法检测PKC各亚型蛋白的转位激活情况。 研究结果: 1.免疫印迹显示在HREC全细胞蛋白中有PKCα,βⅠ,βⅡ和δ、ε五种亚型表达,而没有检测到ζ亚型表达。 2.PMA可诱导PKCα、βⅠ、βⅡ、δ、ε转位激活,灯盏花素可抑制PMA诱导的PKCδ及βⅡ转位激活。 研究结论: 1.PKCα,βⅠ,βⅡ,δ和ε在正常培养的HREC中表达。 2.灯盏花素能够显著抑制PMA诱导的PKCδ及βⅡ转位激活。

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