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保健品抗皮肤衰老功效评估方法的探讨

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第一章引言

第二章材料与方法

第三章结果

第4章讨论

第5章结论

参考文献

附录

致谢

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摘要

皮肤的衰老通常分为内在性老化和外源性老化。内在性老化见于暴露和非暴露部位，明显的特征为皱纹和皮肤松弛。组织学表现为：表皮和真皮变薄，表皮真皮连接处变平、弹性纤维和胶原纤维减少，黑素细胞、郎格罕氏细胞、成纤维细胞、毛细血管袢及感觉神经末梢的减少。外源性老化主要发生在皮肤内源性老化的基础上，常由紫外线等引起，见于面部、颈脖和前臂等光暴露部位，也就是我们通常所说的光老化，表现为粗深的皱纹、异常的色素沉着、毛细血管扩张等。组织学表现为：角质层增厚、表皮细胞极性丧失、黑素细胞增生、基底膜增厚和弹性组织变性。皮肤衰老的临床和组织学改变都是由相关的蛋白、酶和基因的变化引起。自然老化中主要表现为基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)、氧自由基和P53等增多，基质金属蛋白酶抑制因子(tissue inhibitor ofmetalloproteinase，TIMP)、弹力蛋白、胶原蛋白和抗氧化酶的下降；在光老化中，MMP、氧自由基和P53的增多更加明显，还有细胞因子及其受体(如IL-1、EGF等)、TNF-α(tumor necrosis factor，肿瘤坏死因子)、炎症介质(PGE2、COX-2)等的增加，抗氧化酶、原纤维蛋白、胶原纤维和弹力纤维均是减少的，但TIMP和弹力蛋白基因在光老化中是增加的。 抗衰老是国内外美容皮肤病学研究的热门主题。对于抗衰老产品的评估，国际上通常采用研究者评估、受试者自我评估、无创性仪器测量和／或有创性检测的综合方法，近年来还通过检测蛋白、酶和基因学的标记物的改变来反映产品或活性成分的功效。目前保健品抗皮肤衰老功效的人体评估及其标准在国内仍为空白，国外相关的报道也不多。本研究拟采用上述综合评估方法，选取国内外常用的抗衰老产品功效评估指标，探索建立保健品抗皮肤衰老功效的评估方法，为今后此类产品相关的研究提供参考方法。目的通过评估口服枸杞提取物抗皮肤衰老的有效性和安全性，探索建立一种简单易行、经济有效且适合我国国情的保健品抗皮肤衰老功效评估方法。 材料与方法： 1.受试者选择：按照试验设计纳入60名50-60岁的非吸烟健康女性志愿者，详细告知试验目的、内容及流程等以及试验中可能出现的不良反应，受试者以自愿为原则签署知情同意书后进入本试验。 2.研究方法：随机双盲和对照研究方法。 3.抗衰老功效评价标准·研究者评估：用分级照片(photographic scale)评估鱼尾纹、口周皱纹和皮肤Papery样改变；用直观模拟标度尺(Visual analogue scale VAS)评估干燥度、粗糙度；通过部位、面积、严重程度累积评分评估黄褐斑；计数法评估特定部位的其他色素沉着斑和色素异常的程度评估肤色的均匀性。 ·受试者的自我评估：用问卷调查表评估皮肤整体隋况、湿润度、粗糙度、光泽度、弹性、皱纹、着色斑和肤色的均匀性的改善程度。 ·无创性仪器检测：应用Cutometer MPA检测皮肤的弹性和经皮失水(TEWL，transepidermal water loss)，Mexameter18和Minolta CM-2600d／2500d检测皮肤的颜色，Comeometer CM825检测皮肤的含水量、pH值和油脂，Visioncan?VC98检测并分析皮肤的皱纹。 ·有创性实验室检测：HE染色了解皮肤组织学的改变；特殊染色了解弹力纤维和胶原纤维的变化；计数UV照射后晒斑细胞、P53、P21和PCNA的阳性表达率评估对光损伤的防护作用。 4.安全性评估：每个月回访询问并记录服用情况和可能不良反应，试验前后采集血和尿的标本进行相关检查。 结果： 1.60例受试者均按要求完成试验。 2.研究者评估指标中，试验组受试者在试验前后鱼尾纹、口周皱纹、前臂的纹理、面颊的干燥度和粗糙度均改善差异显著(P<0.05)，而安慰剂组受试者在试验前后以上指标也有部分的改善或者变差，但差异无显著性(P>0.05)，但两组间除面颊的干燥度和粗糙度的改善程度的差异有显著性外(P<0.05)，其他均无显著差异。 3.受试者自我评估指标中，对于皮肤整体外观改善情况、皮肤的湿润度、弹性、皱纹、光泽度、粗糙度、着色斑、肤色均匀性等改善方面试验组比对照组总体满意度高，其中湿润度的改善最明显，两组间有显著差异(P<0.05)。 4.无创性仪器检测指标中，两组受试者皮肤的颜色、弹性、含水量、TEWL、pH值、皮肤皱纹分析指标数值的变化趋势一致，试验结束时均较试验开始明显改善，但两组间的这种改善未见显著的差异性；仅试验组的部分指标如面颊的弹性、色度L*值、面颊皱纹和眼角皱纹硅胶复制模型分析中的NRL，(Energy)、SEsc(Scaliness)和R3(Average Roughness)值改善趋势较安慰剂组明显。 5.有创性实验室检测中，HE染色中两组受试者非照射侧皮肤形态结构试验前后未见显著异常；特殊染色中未发现试验组和安慰剂组弹力纤维和胶原纤维染色的显著差异；在UV照射侧，试验结束时，试验组晒斑细胞的形成显著少于安慰剂组(p<0.05)；试验组P53的阳性表达率显著低于安慰剂组(P<0.05)。 6.安全性评估：试验组和对照组的血液和尿液检查无特殊异常改变；试验过程中未出现明显不良反应。 结论： 1.通过研究者的临床评估、受试者的自我评估、无创性仪器检测和／或有创性实验室检测的方法结合可对保健品抗皮肤衰老的人体功效性和安全性做出较科学合理的评价。 2.研究者评估中，面部的粗糙度、干燥度是保健品抗皮肤衰老最敏感的评估指标；鱼尾纹、前臂Papery样改变和黄褐斑是次要敏感评估指标；而手背皱纹、口唇干燥度、其他着色斑和肤色均匀性不适用于抗衰老保健品的功效评估。 3.受试者自我评估中，皮肤的湿润度是最敏感的评估指标；其他如皱纹、粗糙度、弹性、均匀性、肤色、色斑变化和光泽度是次要敏感评估指标。 4.无创性仪器测量中，皮肤的弹性、含水量、TEWL，、色度L*、面颊皱纹和眼角皱纹硅胶复制模型可以作为保健品抗皮肤衰老的次要敏感评估指标，皮肤油脂、黑色素和红色素测定、眼角皮肤皱纹的均不建议作为保健品抗衰老功效评估的检测指标。 5.有创性实验室检测中，UV照射后晒斑细胞和P53的变化可以作为抗衰老保健品对光免疫保护作用的敏感评估指标。

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