人卵巢组织玻璃化冷冻及其对印记基因IGF-2/H19的影响

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

本研究首次探讨人卵巢组织冷冻对生殖细胞印记基因IGF-2／H19是否有影响，比较慢速程序化和固相表面玻璃化冷冻对卵巢组织中原始和初级卵泡IGF-2／H19基因CpG岛的甲基化状态及两基因在卵泡中表达的影响。本研究分三部分： 1.探讨固相表面玻璃化技术和其它载体相比，对人卵巢组织玻璃化冷冻的效果，并在优选载体的基础上，比较不同浓度冷冻保护剂对卵巢组织中卵泡形态的影响及玻璃化冷冻效果； 2.比较固相表面玻璃化冷冻和传统程序化冷冻对人卵巢组织冻存的效果； 3.比较固相表面玻璃化冷冻和程序化冷冻对印记基因IGF-2／H19差异甲基化区(DMR)关键CpG岛甲基化程度及两基因在原始卵泡和初级卵泡表达的影响。第一章　玻璃化冷冻方案对人卵巢组织冻存的研究　　目的：探讨固相表面玻璃化冷冻和其它载体相比，对人卵巢组织玻璃化冷冻的效果，并优选的玻璃化载体基础上，比较不同浓度冷冻保护剂对卵巢组织的毒性和冷冻效果，优选出适合人卵巢皮质的玻璃化冷冻方案。方法 1、标本预处理和分组手术中取得16例卵巢组织，及时切割成5mmx1mmx1mm的皮质小条，随机分到不同处理组：新鲜组(F组)和不同玻璃化组，包括冷冻管玻璃化组(TV组)、最小微滴玻璃化组(MDS组)、不锈钢网筛玻璃化组(SLV组)和固相表面玻璃化组(SSV组)。 2、玻璃化冷冻和复温采用20％DMSO+20％EG溶液作玻璃化冷冻液，梯度渗透卵巢皮质，采用不同载体系统行玻璃化快速冷冻并于液氮保存。复温时，将组织置于37℃ 1 M蔗糖溶液中快速解冻后，经梯度蔗糖浓度逐步洗脱冷冻保护剂。 3、体外培养和检测指标①各组冻融后的卵巢皮质一部分用于体外培养，每隔一天检测培养液中雌二醇和孕酮的浓度； ②新鲜组、其余冻融后皮质以及培养后组织经4％多聚甲醛固定后，制备HE切片，用于组织学观察卵泡形态，盲法计数形态正常及异常的卵泡。 4、不同浓度冷冻液对卵巢组织毒性和用于固相表面玻璃化效果的比较结论: 1、玻璃化冷冻可以保存卵巢组织中大部分原始卵泡和初级卵泡的正常形态，并能较好的保存其体外生长和性激素分泌功能； 2、将固相表面玻璃化冷冻技术用于人卵巢组织冷冻，与冷冻管、最小微滴法、不锈钢网筛相比，首次证明使用的半悬于液氮中的铝箔做载体的SSV技术更适合人卵巢组织的玻璃化冷冻； 3、与15％DMSO+15％EG相比，采用20％DMSO+20％EG为冷冻液并结合SSV技术是一适合人卵巢组织冷冻的有效玻璃化方案。第二章人卵巢组织固相表面玻璃化冷冻和程序化冷冻的比较研究　　目的：比较固相表面玻璃化冷冻和传统程序化冷冻对人卵巢组织冻存的效果。方法: 1、标本预处理和分组临床取得26例卵巢组织，切割成5mm×1mm×1mm皮质小条，随机分到不同处理组：新鲜组(F组)、固相表面玻璃化组(SSV组)和程序化冷冻组(SF组)。 2、卵巢组织冷冻和复苏 ①固相表面玻璃化冷冻：采用第一章优化的SSV冷冻方案； ②程序化冷冻：采用被广泛认可的Gosden程序化冷冻方案。 3、体外培养和检测指标结论: 固相表面玻璃化冷冻和程序化冷冻都能较好的保存人卵巢组织中绝大部分原始和初级卵泡的正常形态以及解冻后体外培养时的生长能力和性激素分泌功能，两者对人卵巢组织的冻存效果相当。第三章　人卵巢组织固相表面玻璃化和程序化冷冻对印记基因IGF-2/H19甲基化程度及其在卵泡表达的影响　　目的：探讨固相表面玻璃化冷冻和程序化冷冻对印记基因IGF-2／H19差异甲基化区(DMR)关键CpG岛甲基化程度及两基因在原始卵泡和初级卵泡表达的影响。方法: 1、卵巢组织的预处理和分组同第二章 2、固相表面玻璃化冷冻和程序化冷冻的过程同第二章 3、检测指标结论: 1、未检测到固相表面玻璃化冷冻和程序化冷冻对印记基因IGF-2／H19 DMR关键CpG位点甲基化程度有影响； 2、未发现两种冷冻方法对原始和初级卵泡中IGF-2蛋白和H19 RNA的表达有影响； 3、未发现人卵巢组织冷冻对生殖细胞印记基因IGF-2／H19有不利影响的证据。

著录项

作者
黄丽丽;
展开▼
作者单位

中山大学;

展开▼
授予单位中山大学;
学科妇产科学
授予学位博士
导师姓名杨冬梓;
年度 2008
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类卵巢疾病;
关键词
卵巢组织; 生殖细胞; 玻璃化冷冻; 印记基因; 甲基化;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 人卵巢组织冷冻对印迹基因IGF-2/H19甲基化程度及表达的影响 [J] . 黄丽丽 ,王文军 ,李琳 . 国际生殖健康/计划生育杂志 . 2012,第006期
2. 胚胎玻璃化冷冻解冻技术对子代胚胎和胎盘中印记基因H19表达及甲基化水平的影响 [J] . 马媛 ,陈书强 ,马夜肥 . 生殖医学杂志 . 2019,第009期
3. 玻璃化冷冻及程序冷冻对人卵巢组织卵泡活性的影响 [J] . 刘丽英 ,曲文玉 ,蒋丽 . 中国临床医学 . 2015,第001期
4. 不同玻璃化冷冻载体对人卵巢组织冷冻效果的影响 [J] . 郑轶 ,周平 . 蚌埠医学院学报 . 2014,第012期
5. 玻璃化冷冻对人卵巢组织形态结构及组织增殖活性的影响 [J] . 潘永苗 ,徐向荣 ,钱羽力 . 浙江大学学报（医学版） . 2013,第001期
6. 玻璃化冷冻对人卵巢组织形态结构及组织增殖活性的影响 [C] . 潘永苗 . 中华医学会第十次全国妇产科学术会议 . 2012
7. 小鼠卵母细胞玻璃化冷冻对DNA损伤和印记基因H19和Gt12表达及DNA甲基化的影响 [A] . 常浩亚 . 2017

人卵巢组织玻璃化冷冻及其对印记基因IGF-2/H19的影响

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅