酿酒酵母RRP12多拷贝校正子的筛选及温度敏感突变株的构建

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DNA复制是生物体维持遗传稳定性的一项重要细胞活动。为了有效地控制DNA复制，细胞必须严格控制DNA复制起始发生在细胞周期的合适时期。近年来，本联合实验室通过遗传学筛选方法发现了RRP12。Rrp12p是核糖体生物合成必需的蛋白，它同时也是复制前复合物的重要组成部分。为了进一步研究RRP12，我们进行了rrp12-td的多拷贝校正子的筛选和rrp12-ts菌株的构建。在RRP12的多拷贝校正子实验中，我们以rrp12-td为起始菌株，通过多拷贝基因组文库的表达，筛选能在38℃有效校正rrp12-td温度敏感表型的菌株。经过几轮的筛选，我们最终发现了两个多拷贝校正子，并通过测序确认两个都为REP1。通过生物信息学分析，我们发现REP1与2mu质粒的维持和质粒的分离有关。在rrp12-ts构建的实验中，通过易错PCR将RRP12基因进行随机扩增，并通过质粒间隙修复技术在rrp12-td中构建了RRP12的突变文库。经过几轮筛选后，我们找到一个可能的rrp12-ts候选菌株，并正在构建rrp12△菌株以最终确认rrp12-ts的温度敏感表型。

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作者
简永强;
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作者单位

中山大学;

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授予单位中山大学;
学科生物化学与分子生物学
授予学位硕士
导师姓名梁纯,陆勇军;
年度 2006
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类基因在蛋白质合成中的作用;
关键词
DNA复制; 细胞周期; 多拷贝校正子; 基因组文库; 生物信息学;

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