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光化学法合成银纳米粒子/蛋壳膜复合物及其在抑菌和固定化α-淀粉酶中的应用

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摘要

符号说明

第一章 前言

1.1 纳米材料简介

1.2 纳米银的特殊效应

1.3 纳米银的应用

1.4 制备纳米银的方法

1.4.1 物理法

1.4.2 化学法

1.5 固定化技术简介

1.5.1 固定化酶的研究意义

1.5.2 酶的固定化方法

1.5.3 固定化的载体

1.6 α-淀粉酶

1.6.1 α-淀粉酶的简述

1.6.2 α-淀粉酶的活性检测

1.7 酶催化动力学概述

1.7.1 酶催化动力学方程

1.7.2 固定化酶的催化动力学性质

1.8 本课题的研究内容与意义

第二章 银纳米粒子/蛋壳膜(AgNPS/ESM)复合物的合成及表征

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 主要仪器和试剂

2.2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.3.1 AgNO3浓度的选择

2.3.2 肉眼观察

2.3.3 紫外-可见漫反射光谱表征

2.3.4 扫描电镜表征

2.3.5 X射线能谱表征

2.3.6 X射线衍射表征

2.3.7 透射电镜和选区电子衍射表征

2.3.8 蛋壳膜上合成银纳米粒子的可能的合成机理

2.4 本章小结

第三章 复合物AgNPs/ESM的抑菌应用

3.1 引言

3.2 实验部分

3.2.1 主要仪器和材料

3.2.2 实验方法

3.3 结果与讨论

3.4 本章小结

第四章 复合物AgNPs/ESM固定化α-淀粉酶的应用

4.1 引言

4.2 实验部分

4.2.1 主要仪器和试剂

4.2.2 基本试剂和溶液配制

4.2.2 实验方法

4.3 结果与讨论

4.3.1 蛋白质标准曲线、检出限和精密度

4.3.2 固定时间对载酶量的影响

4.3.3 麦芽糖标准曲线、检出限和精密度

4.3.4 pH对酶活的影响

4.3.5 温度对酶活的影响

4.3.6 游离酶和固定化酶的动力学常数比较

4.3.7 固定化酶的重复使用稳定性

4.3.8 游离酶与固定化酶的储存稳定性

4.4 本章小结

第五章 总结与展望

5.1 总结

5.2 展望

参考文献

致谢

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摘要

金属纳米粒子的特殊效应使其具有独特的物理、化学和生物学特性,因而被广泛应用于电子行业、医药行业、催化工业以及生物传感等一系列领域。其广阔的应用前景引起了科学研究者们的广泛关注,而在金属纳米材料研究中最基本、最重要的工作之一是纳米粒子的合成。本文通过光化学法在蛋壳膜(ESM)合成银纳米粒子(AgNPs)得到银纳米粒子/蛋壳膜(AgNPs/ESM)复合物,该合成方法具有条件温和、操作简单、经济环保的优点。
  本课题的主要研究内容如下:
  1.银纳米粒子/蛋壳膜复合物的合成及表征。以光化学法在蛋壳膜上合成银纳米粒子。通过肉眼观察反应前后蛋壳膜颜色变化;紫外-可见漫反射光谱和X射线能谱(EDX)表征蛋壳膜上合成了银纳米粒子;场发射扫描电镜(FESEM)表征AgNPs/ESM表面微观结构;高分辨透射电镜(HRTEM)表征银纳米粒子的形貌、分散性及粒径分布;X射线衍射(XRD)和选区电子衍射(SAED)表征银纳米粒子的晶体结构。
  2.纳米生物复合物AgNPs/ESM的抑菌应用。采用纸片扩散法研究了AgNPs/ESM对两种细菌大肠杆菌DH5α和金黄色葡萄球菌NICPBP26003的抑菌效果。
  3.纳米生物复合物AgNPs/ESM固定化α-淀粉酶的应用。利用蛋壳膜的微观纤维网状结构具有高的比表面积及机械强度的优势,用交联法以戊二醛为交联剂将α-淀粉酶分别固定在ESM和AgNPs/ESM上,并研究固定化前后α-淀粉酶的酶学性质的变化情况。
  研究结果表明:
  1.蛋壳膜和AgNO3溶液在模拟太阳光的照射下能较地快合成银纳米粒子,而同样的反应体系避光条件下不发生反应,表明光在纳米粒子合成过程中起着关键作用。
  2.蛋壳膜上合成得到球形、分散性好的AgNPs,由于蛋壳膜的限制膜和外壳膜的结构差异,导致在蛋壳膜两面合成得到粒径分布不同的AgNPs,限制膜面和外壳膜面上的银纳米粒子粒径大部分分布在4.8-16.0nm和15.8-31.4 nm之间,平均粒径分别为10.4 nm和23.6 nm。这两个面上的银纳米粒子的晶型均是面心立方结构,晶面间距分别为0.231 nm和0.245 nm。
  3.纳米生物复合物AgNPs/ESM有着良好的抑菌性能,其抑菌性能来自于复合物上的银纳米粒子,对大肠杆菌的抑菌效果优于金黄色葡萄球菌。
  4.与游离酶和ESM固定化α-淀粉酶相比,纳米生物复合物AgNPs/ESM固定化α-淀粉酶后,α-淀粉酶具有更宽的适用条件和更好的储存稳定性。

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