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【6h】

王清任经典活血化瘀方剂对重型颅脑损伤大鼠急性期血清IL-6、IL-10及脑细胞凋亡的影响

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摘要

目的：观察王清任经典活血化瘀方剂对重型颅脑损伤SD(Sprague-Dawley)大鼠伤后不同时间点（24h、72h和168h）外周血血清中白介素6（interleukin-6，IL-6）、IL-10含量及脑细胞凋亡、脑组织中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，并探讨其对重型颅脑损伤大鼠急性期神经损伤的治疗作用。
　　方法：将120只SPF级健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、模型组（B组）、血府逐瘀汤治疗组（C组）、通窍活血汤治疗组（D组）以及补阳还五汤治疗组（E组）;每组24只，按照造模后24h、72h、168h不同时间点再分为三个亚组，每个时间点8只。除正常对照组外，其余各组采用改良的Feeney's自由落体方法制备重型颅脑损伤大鼠模型。造模后6h，A、B组给予生理盐水灌胃，C、D、E组分别给予血府逐瘀汤、通窍活血汤、补阳还五汤水提取物灌胃。各组大鼠每天进行体重测量和神经功能缺损评分(NSS)，并做好记录;各组分别在造模后第24h、72h、168h三个时间点取材，采集外周血及脑组织标本。用酶联免疫吸附（ELISA）法检测外周血血清中IL-6、IL-10含量;用HE染色方法观察脑组织的病理变化;用TUNEL法检测脑细胞凋亡;用免疫组化方法检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达。
　　结果：(1)正常对照组大鼠体重随着时间的增长逐渐增加，在第168h达到最大值;模型组大鼠体重随着时间增长而逐渐减轻，在第168h下降到最低值;用药干预后，各治疗组大鼠体重虽然随实验时间的增长逐步下降，但各治疗组大鼠体重在造模后第72h、168h两个时间点明显高于模型组大鼠。正常对照组大鼠无神经功能缺损表现;造模6h后，模型组及各治疗组大鼠神经功能缺损评分明显升高，且评分随时间呈递减趋势，并均在造模后第168h下降至最低。与模型组相比，各治疗组神经功能损伤恢复的速度明显加快。血府逐瘀汤治疗组、通窍活血汤治疗组、补阳还五汤治疗组NSS评分在造模后第24h、72h及168h三个时间点明显低于模型组，但三组各时间点比较无统计学差异。
　　(2)正常对照组脑组织切片镜下结构完整，轮廓清晰，细胞排列整齐，胞核蓝染，染色均匀，无组织细胞水肿、坏死;模型组脑组织切片镜下可见细胞排列紊乱，组织细胞水肿明显，局部细胞坏死，大量细胞核固缩。血府逐瘀汤治疗组、通窍活血汤治疗组以及补阳还五汤治疗组脑组织切片组织细胞水肿、坏死以及细胞核固缩情况低于模型组。
　　(3)模型组大鼠外周血血清中IL-6含量在伤后第24h明显升高，之后明显下降，至第168h降至最低值，但仍高于正常对照组。血府逐瘀汤治疗组、通窍活血汤治疗组、补阳还五汤治疗组在伤后第24h、72h两个时间点外周血血清中IL-6含量明显低于模型组，在伤后第168h三组IL-6含量与模型组比较无统计学差异;在伤后第24h，血府逐瘀汤治疗组与通窍活血汤治疗组的血清IL-6含量明显低于补阳还五汤治疗组。
　　(4)模型组及各治疗组大鼠外周血血清中IL-10含量在伤后第24h、72h、168h三个时间点均明显高于正常对照组。模型组血清中IL-10含量在伤后三个时间点之间无统计学差异。血府逐瘀汤治疗组血清中IL-10含量在伤后第24h含量最低，之后逐渐升高，在第168h含量达到最高值;其中在第24h、72h两个时间点与模型组相比无统计学差异，在第168h明显高于模型组;通窍活血汤治疗组和补阳还五汤治疗组血清中IL-10含量在各时间点与模型组相比无统计学差异。
　　(5)大鼠在伤后即出现大量脑细胞凋亡。与正常对照组比较，模型组及各治疗组在伤后第24h、72h、168h三个时间点细胞凋亡率均明显升高，模型组在伤后第24h细胞凋亡率明显升高，在伤后第72h达到最高水平，第168h凋亡率明显降低，各治疗组细胞凋亡率均在伤后第24h达到最高值，明显高于伤后72h和168h。与模型组相比，各治疗组大鼠脑细胞凋亡率在伤后第24h、72h以及168h三个时间点明显降低。与补阳还五汤治疗组比较，血府逐瘀汤治疗组、通窍活血汤治疗组脑细胞凋亡率在伤后第24h、72h两个时间点明显降低。血府逐瘀汤治疗组和通窍活血汤治疗组相比，在三个时间点脑细胞凋亡率无统计学差异。
　　(6)模型组和各治疗组大鼠在伤后各时间点Bcl-2蛋白的表达较正常对照组均明显增多;模型组大鼠Bcl-2蛋白表达在伤后第24h即达到一个较高的水平，随后开始逐渐下降。与模型组比较，各治疗组大鼠Bcl-2蛋白表达在伤后第24h无统计学差异，在伤后第72h、168h两个时间点则明显增多，并均在第168h达到最高峰。与补阳还五汤治疗组相比，血府逐瘀汤治疗组以及通窍活血汤治疗组Bcl-2蛋白表达在伤后第72h更为明显。
　　(7)模型组及各治疗组大鼠在伤后各时间点Bax蛋白的表达较正常对照组均明显增多。模型组大鼠Bax蛋白的表达在第72h达到最高峰，随后逐渐降低。各治疗组大鼠Bax蛋白的表达在伤后24h达到最大值，随着实验时间增长其表达逐渐降低。与模型组比较，各治疗组在伤后第24hBax蛋白的表达无统计学差异，但在伤后第72h、168h两个时间点Bax蛋白的表达明显减少。其中与通窍活血汤治疗组、补阳还五汤治疗组比较，血府逐瘀汤治疗组Bax蛋白的表达在第72h明显降低。
　　结论：血府逐瘀汤、通窍活血汤和补阳还五汤对重型颅脑损伤大鼠急性期的神经损伤具有一定的治疗作用。血府逐瘀汤、通窍活血汤和补阳还五汤对重型颅脑损伤的治疗作用可能是通过降低IL-6的含量、抑制Bax的表达，并升高IL-10的含量、上调Bcl-2的表达，从而减轻继发性炎症反应，减少脑细胞凋亡，改善重型颅脑损伤大鼠神经损伤的预后。从各指标的结果综合来看，血府逐瘀汤在三方中效果最好，其次是通窍活血汤，最后是补阳还五汤。

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