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南方壁虎制剂对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌癌前病变的抑制作用的研究

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摘要

前言

材料与方法

一 材料

二．方法

结果

一．一般情况

二．γ-GT阳性灶的统计结果

三．免疫组化指标

讨论

结论

参考文献

综述 壁虎抗肿瘤研究的进展

附录

致谢

读硕期间发表的论文

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摘要

目的:
　　利用Solt-Farber的DEN诱导肝癌癌前病变短期动物模型，期间给予不同剂量的南方壁虎制剂进行干预，探讨不同浓度南方壁虎制剂对DEN致大鼠肝癌癌前病变的作用。
　　方法:
　　健康雄性SD大鼠，6周龄，体重(115±10)g，按随机分组法分为A、B、C、D、E5组，除E组外，每组各20只动物，E组18只。 A、B和C组为分别给予高(1.8 g/kg)、中(0.9 g/kg)、低(0.45 g/kg)剂量的南方壁虎制剂的实验组，D组为DEN阳性对照组和E组为空白对照组。动物进入实验室适应环境1周后，A、B、C组分别用上述不同剂量的南方壁虎的制剂灌胃4周。A、B、C、D组的动物在实验的第3周腹腔注射1剂DEN，剂量为200 mg/ kg.体重，实验第5周开始喂含0.015％的2-AAF饲料2周。E组作为空白对照，在整个实验过程中不做任何处理，仅喂正常饲料。在实验的第6周所有动物在0.1％戊巴比妥麻醉下行肝大部分(2/3)切除术，实验第7周停2-AAF饲料后换食正常饲料2d，再禁食1d后，断颈处死所有动物。取出肝脏，在右前、右后叶最大直径处各取2块，尾叶中部取1块，每块厚2 mm的肝组织，共5块。立即固定于冷(4℃)酒精-丙酮(1∶1/V∶V)固定液，24 h之后进行低温(52～54℃)石蜡包埋，切片按改良的Rutenberg法作γ-GT染色，将r-GT染色切片在普通相片放大机下放大12倍，在复印纸上画出每张切片的大小和每张切片中每个灶的大小，用扫描仪将画出的每张图形扫入计算机，然后用本科室设计的程序计算出各组每cm2肝切面r-GT灶的个数（个/cm2）、灶的总面积(mm2/cm2)及每个灶的面积（mm2/个）。动物处死时，另取一块肝组织作常温石蜡包埋。用免疫组织化学染色方法（SP法）对各组的肝切时的肝组织和处死时的肝组织切片进行ki-67，EFGR，ErbB4蛋白检测，观察各切片中这些蛋白表达情况，并与γ-GT阳性灶作比较。
　　结果:
　　不同剂量南方壁虎实验组γ-GT阳性灶的数量、面积均小于DEN对照组，其中低剂量组与阳性对照的差别有统计学差异(P＜0.05)。各组肝组织均表达ki67，EGFR和ErbB4。Ki-67在低剂量组中的阳性和强阳性的表达率(20.0％)与阳性对照组(73.3％)有显著差异(P＜0.05);EGFR在高剂量和低剂量的阳性和强阳性的表达率分别为22.2％和10.0％，与阳性对照组(40.0％)有显著差异(P＜0.05);ErbB4不同剂量组的表达均高于阳性对照组，但无统计学差异（P＞0.05）。
　　结论:
　　1.南方壁虎制剂对DEN诱发大鼠肝细胞癌癌前病变有一定的抑制作用。
　　2.不同剂量的南方壁虎制剂对大鼠肝癌前病变均有抑制作用，但无明显的剂量—效应反应趋势。
　　3.ki-67与r-谷氨酰转肽酶(r-GT)阳性细胞灶结果一致，可能做为一种新的衡量肝癌前病变的指标之一。
　　4.EGFR可能参与南方壁虎抑制肝癌癌前病变的调节作用。

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