山羊TYRP1基因和PMEL基因转录调控机制研究

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论文说明

摘要

1．1．1 毛色遗传现状

1．1．2 TYRP1基因参与黑色素形成过程

1．1．3 PMEL基因参与黑色素形成过程

1．1．4 动物毛色的作用

1．2 TYRP1基因和PMEL基因作用机理及其研究现状

1．2．1 TYRP1基因作用机理及其研究现状

1．2．2 PMEL基因作用机理及其研究现状

1．3 山羊TYRP1基因和PMEL基因作用机理及其研究现状

1．4．1 真核生物的启动子

1．4．2 启动子的研究方法

1．5 转录因子结合位点的研究方法

1．5．1 真核生物转录因子

1．5．2 转录因子结合位点的研究方法

1．6 本研究的主要内容和意义

2．1．1 山羊DNA样品

2．1．2 菌株

2．1．3 质粒

2．1．4 细胞

2．1．5 主要试剂及其配置方法

2．1．6 仪器设备

2．1．7 分子生物学及数据分析软件

2．2 方法

2．2．1 山羊DNA的提取

2．2．2 山羊TYRP1基因引物设计

2．2．3 山羊PMEL基因引物设计

2．2．4 PCR扩增

2．2．5 琼脂糖凝胶电泳检测

2．2．6 PCR产物的回收和纯化

2．2．7 PCR回收产物与T-Vector pMD19(SimP1e)连接

2．2．8 连接产物的转化

2．2．9 重组质粒的快速筛选

2．2．10 质粒的小量提取

2．2．11 重组质粒和pGL3-Basic质粒的双酶切及目的片段回收

2．2．12 酶切后的片段的连接及转化

2．2．13 阳性重组质粒pGL3-Basic-X的鉴定

2．2．14 阳性重组质粒pGL3-Basic-X的无内毒素大量提取和浓度测定

2．2．15 细胞培养

2．2．16 细胞瞬时转染

2．2．17 Dual-Luciferase Reporter Assay System鉴定

2．2．18 数据处理

3 结果与分析

3．1．3 TYRP1基因候选启动子区同源序列分析

3．1．4 PMEL基因候选启动子区同源序列分析

3．1．7 山羊TYRP1基因和PMEL基因启动子候选区域的预测结果

3．1．8 山羊PMEL基因转录因子的预测结果

3．2 山羊TYRP1基因和PMEL基因预测启动子片段的获得

3．3 重组质粒pMD19-X的获得

3．3．3 重组质粒pMD19-X测序鉴定

3．4．2 重组质粒pGL3-Basic-X酶切鉴定

3．4．3 重组质粒pGL3-Basic-X测序鉴定

3．5 细胞培养

3．6 细胞瞬时转染及缺失片段的活性分析

3．6．1 最佳转染效率的确定

3．6．2 山羊TYRP1基因和PMEL基因启动子缺失片断活性分析

3．6．3 山羊PMEL基因核心启动子区转录因子结合位点活性分析

4．1 启动子生物信息学分析

4．2 TYRP1基因非启动子活性区分析

4．3 PMEL基因启动子活性区分析

4．4 转录因子结合位点分析

5 结论

参考文献

在读期间发表论文情况

作者简历

致谢