文摘
英文文摘
英文缩写表
第一章 引言
1.1 猪圆环病毒2型的国内外研究概况
1.1.1 病原学
1.1.2 流行病学
1.1.3 PCV2对机体免疫系统的影响
1.1.4 PCV2的诊断
1.1.5.PCV2的防治进展
1.2 RNAi技术研究进展
1.2.1 RNAi的特征
1.2.2 RNAi的作用机理
1.2.3 RNAi应用于哺乳动物细胞的研究策略
1.2.4 RNAi在哺乳动物中的应用和研究进展
1.3 研究内容和技术路线
1.3.1 研究内容
1.3.2 技术路线
1.4 研究目的与意义
1.5 研究目标
第二章 SIRNA序列的设计与PGENSIL-SHRNA表达质粒的构建
2.1 材料
2.1.1 质粒和菌株
2.1.2 主要试剂和试剂盒
2.1.3 质粒DNA小量提取用试剂
2.1.4 琼脂糖凝胶电泳所用溶液
2.1.5 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 siRNA靶序列的选择
2.2.2 编码shRNA的DNA单链的设计与合成
2.2.3 siRNA表达质粒的构建
2.2.4 pGensil-shRNA质粒的鉴定和制备
2.3 结果与分析
2.3.1 siRNA靶序列局部二级结构预测
2.3.2 pGensil-shRNA质粒的PCR鉴定
2.3.3 pGensil-shRNA质粒的PCR产物的测序结果
2.3.4 pGensil-shRNA质粒纯度测定
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 基于质粒表达的SIRNA在PK-15细胞中对PCV2复制的抑制效应
3.1 材料
3.1.1 病毒与细胞株
3.1.2 主要试剂
3.1.3 RNA和DNA提取试剂
3.1.4 细胞培养用溶液
3.1.5 SDS-PAGE和免疫印迹所用试剂及材料
3.1.6 过氧化物酶单层试验所用试剂及材料
3.1.7 主要仪器设备
3.2 方法
3.2.1 PCV2 SD/2008株病毒培养物TCID50的测定
3.2.2 检测PCV2实时荧光定量PCR标准曲线的建立
3.2.3 pGensil-shRNA表达质粒的瞬时转染和转染效率的检测
3.2.4 不同质粒表达的siRNA对PCV2抑制效果的检测
3.2.5 siRNA表达质粒抑制PCV2复制的时效性分析
3.2.6 抑制作用量-效关系的分析
3.2.7 针对不同靶位的siRNA表达质粒对PCV2协同抑制效应的检测
3.2.8 数据表示和统计分析
3.3 结果与分析
3.3.1 PCV2 SD/2008病毒液TCID50的测定
3.3.2 检测PCV2的Real-time FQ-PCR标准曲线
3.3.3 siRNA表达质粒的转染效率
3.3.4 质粒表达的siRNA能够有效地抑制PCV2在PK-15细胞内增殖
3.3.5 siRNA表达质粒转染后对PCV2的抑制的时效性分析
3.3.6 质粒表达的siRNA对PCV2的抑制作用具有量-效性
3.3.7 混合不同pGensil-shRNA表达质粒对PCV2的抑制效应具有协同作用
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 基于质粒表达的SIRNA对PCV2在小鼠体内增殖及致病性的抑制效应
4.1 材料
4.1.1 试验动物
4.1.2 主要试剂
4.1.3 质粒DNA提取用溶液
4.1.4 ELISIA用溶液
4.1.5 HE染色及免疫组化试剂
4.1.6 其他试剂
4.1.7 主要仪器
4.2 方法
4.2.1 pGensil-shRNA表达质粒的大量提取及纯化
4.2.2 小鼠抗PCV2抗体的制备
4.2.3 动物试验设计、pGensil-shRNA表达质粒体内注射及攻毒
4.2.4 临床症状、剖检病变及体重变化的观察
4.2.5 PCV2特异性抗体的检测
4.2.6 血清中PCV2核酸的检测
4.2.7 组织中PCV2核酸的检测
4.2.8 组织病理学检测
4.2.9 免疫组化检测
4.2.10组织中pGensil-shRNA表达质粒的检测
3.2.11数据表示和统计分析
4.3 结果与分析
4.3.1 PCV2特异性抗体
4.3.2 临床症状、肉眼病变及体重
4.3.3 接种siRNA表达质粒的小鼠血清中仅出现低水平的PCV2特异性抗体
4.3.4 siRNA表达质粒显著降低了小鼠病毒血症的阳性率
4.3.5 质粒表达的siRNA降低了组织中PCV2核酸的含量
4.3.6 质粒表达的siRNA减轻了PCV2引起的组织病变
4.3.7 质粒表达的siRNA降低了小鼠淋巴组织中PCV2的载量
4.3.8 siRNA表达质粒可以在组织中稳定存在
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文与获得的研究成果
作者简介
致谢
