牛Gtl2基因的克隆及Dlk1-Gtl2印记区域在体细胞核移植牛中的DNA甲基化状态分析

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缩略词表

1 引言

1.1 体细胞核移植技术概况

1.1.1 体细胞核移植技术

1.1.2 体细胞核移植存在的问题及研究现状

1.1.3 体细胞核移植与表观重编程

1.2 基因组印记研究进展

1.2.1 基因组印记及其发现

1.2.2 印记基因的特征

1.3 DNA甲基化

1.3.1 DNA甲基化概述

1.3.2 DNA甲基化的检测方法

1.3.3 体细胞核移植动物中DNA甲基化研究

1.4 RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术

1.5 Dlk1-Gtl2印记区域的研究现状

1.5.1 Gtl2基因

1.5.2 Dlk1基因

1.5.3 Dlk1-Gtl2印记区域中的3个DMRs

1.6 研究内容及意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 牛组织材料

2.1.2 生化药品及试剂

2.1.3 培养基的配置

2.1.4 其他试剂的配制

2.1.5 主要仪器和设备

2.2 实验方法

2.2.1 牛肺脏总RNA的提取及检测

2.2.2 牛Gtl2基因cDNA的克隆

2.2.3 牛Gtl2基因全长的获得及其序列分析

2.2.4 牛Gtl2基因的牛肺脏基因组DNA的提取及检测

2.2.5 牛Dlk1-Gtl2印记区域DMRs的确定

2.2.6 牛Dlk1-Gtl2印记区域甲基化状态分析

3 结果与分析

3.1 总RNA的提取

3.2 牛Gtl2基因cDNA的克隆

3.2.1 牛Gtl2基因RT-PCR扩增结果

3.2.2 牛Gtl2基因3’RACE扩增结果

3.2.3 牛Gtl2基因5’RACE扩增结果

3.3 牛Gtl2基因序列生物信息学分析

3.3.1 Gtl2基因在各物种中的同源性比对

3.3.2 牛Gtl2基因可变剪切形式

3.3.3 牛Gtl2基因开放读码框的预测

3.4 基因组DNA的提取和检测结果

3.5.Dlkl-Gtl2印记区域DMR区的确定

3.6 BSP-PCR 印记区域基状态分析

4 讨论

4.1 牛Gtl2基因序列生物信息学分析

4.2 体细胞核移植牛中Dlk1-Gtl2印记区域甲基化状态分析

5 结论

5.1 牛Gtl2基因cDNA序列分析

5.2 Dlk1-Gtl2印记区域DMR.s的确定

5.3 Dlk1-Gtl2印记区域甲基化状态分析

参考文献

在读期间发表学术论文

简历

致谢

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