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【6h】

树麻雀VEGF基因克隆及其在不同组织、不同海拔的表达量研究

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目录

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摘要

1 综述

1.1 VEGF家族结构及分布

1.2 VEGF受体

1.3 VEGF的功能

1.4 VEGF的调控

1.5 研究目的和意义

2 研究方法

2.1 样品的采集及处理

2.1.1 样品采集用具

2.1.2 样品的采集及处理

2.2 VEGF基因的克隆及分析

2.2.1 实验药品及仪器

2.2.2 缓冲液及主要试剂配制

2.2.3 RNA提取

2.2.4 RNA反转录成cDNA

2.2.5 PCR扩增反应

2.2.6 回收目的产物

2.2.7 目的片段连接到克隆载体及转化

2.2.8 质粒提取

2.2.9 DNA测序和分析

2.3 VEGF mRNA的定量分析

2.3.1 实验仪器及药品

2.3.2 实验原理

2.3.3 RNA提取

2.3.4 RNA反转录成cDNA

2.3.5 实时荧光定量PCR

2.3.6 数据分析和处理方法

3 实验结果

3.1 RNA提取

3.2 PCR扩增目的基因片段

3.3 利用菌落PCR法检测克隆基因片段

3.4 质粒PCR结果

3.5 核酸测序结果及分析

3.6 信号肽序列的预测、氨基酸组成及结构分析

3.7 VEGF mRNA在各组织器官中的表达

3.7.1 VEGF mRNA在各组织器官的表达

3.8 不同海拔区树麻雀肝脏中VEGF mRNA的表达量

3.8.1 不同海拔区树麻雀肝脏中VEGF mRNA的表达量

4 讨论

4.1 VEGF基因克隆及序列分析

4.2 VEGF基因mRNA在各组织器官中的表达

4.3 不同海拔区树麻雀中VEGF基因mRNA的表达量

结论

参考文献

致谢

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摘要

血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)能促进动物生理及病理状态下血管生成,维持血管正常功能,诱导内皮细胞分裂,增加血管通透性,是动物体内重要的生长因子。本实验以树麻雀为研究对象,利用分子生物学方法克隆树麻雀VEGF基因开放阅读框核苷酸序列,并对VEGFmRNA在树麻雀各组织内的表达量进行比较分析。此外,还比较青藏高原和低海拔区树麻雀肝脏内VEGF表达量的差异性,主要研究结果如下:
   (1)树麻雀VEGF开放阅读框内核苷酸序列为651bp,与鸟类中鹌鹑和家鸡的同源性均为97%,与爬行类有鳞目不同种类的同源性为69-94%,与硬骨鱼类、两栖类、哺乳类相比,不存在同源性。
   (2)树麻雀VEGF氨基酸序列由216个氨基酸组成,分子量为30668.161Da,等电点为9.775,与鸟类中家鸡和原鸽的同源性分别为97%、98%,与硬骨鱼类斑马鱼同源性为55%,与两栖类热带爪蟾和非洲爪蟾的同源性分别为67%、68%,与爬行类有鳞目不同种类同源性为64-78%,与哺乳类不同种类同源性为63-77%。VEGF氨基酸序列在脊椎动物不同类群之间存在一定的保守性,说明在脊椎动物中特定功能基因的进化具有保守性和趋同性。
   (3)树麻雀肝脏中VEGFmRNA表达量显著高于肾脏、脑、肺,心脏中VEGFmRNA表达量显著高于脑、肺,性腺中VEGFmRNA表达量显著低于肝脏、肾脏、心脏、脑、肺。实验结果表明VEGFmRNA表达量与代谢能力和强度、动物生长状态等因素相关。
   (4)低海拔区树麻雀肝脏VEGFmRNA表达量显著高于青藏高原区,青藏高原鸟类如何在VEGF基因和蛋白水平适应低氧环境的生理机制有待于进一步研究。

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