穴位贴敷联合穴位注射乌体林斯对OVA诱导哮喘大鼠气道炎症和高反应性的影响

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目的：
　　1.观察穴位贴敷联合穴位注射乌体林斯治疗哮喘的效果。
　　2.通过检测肺组织白介素(IL)-4、IL-5，血清IL-4、免疫球蛋白E(IgE)水平，观察肺组织核因子-kappaB(NF-κB)活化情况，肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和分类计数，肺组织病理变化，探讨贴敷联合穴注在抑制哮喘气道炎症上的可能机制。
　　3.通过检测肺组织内皮素-1(ET-1)的变化，探讨穴注和贴敷对哮喘气道高反应影响。
　　方法：65只清洁级级雄性Wistar大鼠(4周龄)适应性饲养1周后随机分为5组{正常组、哮喘组、贴注组(贴敷+穴注组)、布地奈德组、联合组}，每组13只。哮喘组大鼠以10％卵蛋白分两次(第1天，第8天)腹腔注射致敏，每次1ml(内含OVA100mg，Al(OH)3100mg)，第15天以2%卵蛋白连续激发制作哮喘模型。正常组以生理盐水代替OVA进行上述程序。观察大鼠出现烦躁，咳嗽，呼吸加快，点头呼吸，行动迟缓,口唇紫绀,甚至腹肌痉挛等症状，随着激发次数的增加观察到以上症状在每次激发的早期即出现；取血检测嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数，发现其增高符合相关文献报道水平；取肺组织HE染色后镜下观察可见肺组织炎性浸润；综合以上3个条件认为造模成功。造模成功后开始治疗，贴注组选取大椎穴、双定喘穴、双肺俞穴、双肾俞穴，使用科室自制贴敷药物进行贴敷，选取双定喘、双肺俞穴交替使用乌体林斯穴位注射(穴位注射后不再贴敷药物)，3次/周；布地奈德组给予吸入用布地奈德雾化吸入溶液雾化治疗，1/日；联合治疗组采用贴敷、穴位注射、布地奈德雾化3种方法进行治疗,共治疗一个月(计12次)。治疗期间每周给予3次激发以模拟哮喘慢性持续期。实验过程中观察各组大鼠一般情况，处死前再次给予激发，24小时内取材，标本包括支气管肺泡灌洗液(BALF)、动脉血及肺组织标本。血细胞计数板计数大鼠BALF中总细胞数和分类比例；苏木精-伊红染色(HE)后镜下观察肺组织病理学改变并进行炎细胞浸润评分；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清总IgE、IL-4,放射免疫法测定肺组织中ET-1、IL-4、IL-5；免疫组化染色后镜下观察肺组织NF-κBp65胞核阳性表达情况，显微图像分析系统分析阳性细胞积分光密度值(IOD)。
　　结果：
　　1.与正常组比较，哮喘组肺组织病理结果显示炎细胞浸润和气道损伤程度较重，炎细胞浸润评分增高有统计学意义。与哮喘组比较，贴注组、布地奈德组、联合组，大鼠肺组织炎症细胞浸润评分均降低,有统计学意义。
　　2.与正常组比较，哮喘组大鼠体质量降低；BALF中细胞总数、中性%、淋巴%、EOS%，血清IL-4、IgE，肺组织ET-1、IL-4、IL-5和NF-κB阳性细胞IOD值明显升高。
　　3.与哮喘组比较，各治疗组大鼠BALF中细胞总数、中性%、淋巴%、EOS%，血清IL-4、IgE，肺组织ET-1、IL-5、IL-4和NF-κB阳性细胞IOD值均降低；体重改变无差异。
　　4.各治疗组之间比较：与贴敷组、布地奈德组比较，联合组BALF中总细胞和分类计数，血清IL-4、IgE，肺组织ET-1、IL-5、IL-4和NF-κB阳性细胞IOD值降低更明显；与贴注组比较，布地奈德组BALF中总细胞和分类计数，血清IL-4、IgE，肺组织IL-5、IL-4、NF-κB阳性细胞IOD值降低明显,肺组织ET-1改变无统计学意义。
　　5.相关性分析:肺组织IL-4与IOD呈正相关；肺组织IL-5与IOD呈正相关；血清IL-4与IgE水平呈正相关；肺组织IL-5和EOS%呈正相关。
　　结论：
　　1.通过抗原致敏并反复激发所致OVA特异性哮喘大鼠模型复制成功。
　　2.哮喘组BALF中细胞总数和分类计数百分比，血清IL-4、IgE水平，肺组织IL-5、IL-4、ET-1表达升高；NF-κB由胞浆进入细胞核，IOD值升高，说明这些指标参与哮喘发生；那么治疗组的这些指标的表达情况对治疗后哮喘的评估以及治疗方法有效性具有指导意义。
　　3.穴位贴敷加穴位注射治疗在改善以上指标的作用不如单独使用激素，但是，穴位贴敷加穴位注射治疗并联合激素后的效果较单独使用任何两法更加明显。作用机制可能与①抑制NF-κB活化，进而减少由此引发的Th2细胞分泌的炎症因子IL-4、IL-5的产生②减少肺组织ET-1表达，减轻气道高反应有关。

著录项

作者
梁志娟;
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作者单位

河北医科大学;

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授予单位河北医科大学;
学科中西医结合临床
授予学位硕士
导师姓名耿立梅;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R562.25;
关键词
支气管哮喘; 穴位注射; 穴位贴敷; 草分枝杆菌; 免疫组化染色; 气道炎症;

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