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肝细胞肝癌组织中肝癌干细胞与肝癌转移的关系

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摘要

目的:Thy-1、CD34、CK-7、AFP作为肝癌干细胞的标志物已被初步证实,而E-cadherin、VEGF是已被公认的反应肿瘤增殖活性、转移以及用来评价预后的蛋白。本实验用免疫组织化学技术研究肝癌干细胞标志物Thy-1、CD34、CK-7、AFP及转移标志物E-Cadherin、VEGF在不同肝组织中的表达及其临床特征的关系,我们通过分析研究肝癌干细胞标志物与转移指标之间的相关性进一步探讨肝癌干细胞与转移及预后的关系。
　　 方法:1研究对象50例肝细胞癌癌组织、50例癌旁硬化肝组织及20例肝血管瘤周边正常肝组织(作为对照)均来自河北医科大学第四医院肝胆外科2008年4月～2009年5月手术切除标本。所有组织类型均经河北医科大学第四医院病理科确诊。所有患者术前均未进行任何形式的治疗。
　　 2研究方法:组织切除后经10％中性甲醛固定后石蜡包埋备用。应用免疫组织化学法检测Thy-1、CD34、CK-7、AFP及E-Cadherin、VEGF在不同肝组织中的表达情况。对肝癌患者的临床资料进行汇总,探讨各蛋白间的相互关系及其与肝细胞癌患者临床表现间的关系。随访患者生存情况,比较各蛋白表达对不同临床分期肝癌患者预后的影响。
　　 结果:1临床病理资料对肝癌患者术后生存的影响:年龄、性别、病灶大小、HBsAg、HBeAb对肝细胞癌患者的预后的影响无显著性差异,而临床分期、病理分级及瘤栓或伴有肝内转移、血清AFP对肝细胞癌患者的预后的影响有显著性差异。临床分期较早、病理分化较好、不伴有瘤栓或肝内转移,血清AFP＜400ug/L者生存率较高,平均生存时间较长,预后较好。
　　 2 Thy-1表达于肝癌癌组织及癌旁组织,正常肝组织几乎不表达,表现为细胞浆及细胞膜黄染。Thy-1在癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织与正常肝组织,癌旁硬化肝组织表达和正常组织表达无统计学差异。Thy-1在肝癌组织的表达与性别、年龄、AFP、HBeAb阴阳性、乙肝有无无关;在伴有门脉瘤栓或肝内转移的癌组织中表达强于不伴有门脉瘤栓及肝内转移者;在肝癌临床分期较晚的癌组织Thy-1的表达强于分期较早者;在肝癌病理分级低分化的癌组织Thy-1的表达强于高分化者;Thy-1与VEGF在肝癌组织中的表达呈正相关;与E-cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关。Thy-1表达(-～+)及(++～+++)者累积生存率分别为73.3％和9.1％,平均生存时间分别为17.85月和9.16月。Thy-1表达越强,生存率越低,平均生存时间越短,预后越差。
　　 3 CK-7表达于肝癌癌组织及癌旁组织,正常肝组织几乎不表达,表现为细胞浆及细胞膜黄染。CK-7在癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组织(0例/20例),癌旁硬化肝组织表达和正常组织表达无统计学差异。CK-7在肝癌组织的表达与性别、年龄、AFP、HBeAb阴阳性、乙肝有无无关;在伴有门脉瘤栓或肝内转移的癌组织中表达强于不伴有门脉瘤栓及肝内转移者在肝癌临床分期较晚的癌组织及(X2=18.060,P=0.001;r=0.581,P=0.000)病理分级低分化的癌组织CK-7的表达强于高分化者;CK-7与VEGF在肝癌组织中的表达呈正相关(r=0.494,P=0.000);同E-cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关。(r=-0.374,P=0.002)。CK-7表达(-～+)及(++～+++)者累积生存率分别为58.8％和15.0％,平均生存时间分别为15.70月和10.01月。CK-7表达越强,生存率越低,平均生存时间越短,预后越差(X2=6.272,P=0.012)。
　　 4 AFP在各组肝组织均有表达,表现为细胞浆及细胞膜黄染。AFP在癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组织(3例/20例)(Z=-2.790 P=0.005和Z=-4.881,P=0.000),癌旁硬化肝组织表达和正常组织表达无统计学差异。AFP在肝癌组织的表达与性别、年龄、AFP、HBeAb阴阳性、乙肝有无无关;在伴有门脉瘤栓或肝内转移的肝癌组织中表达强于不伴有肝内转移或门脉瘤栓者(Z=-4.216,P=0.000;r=0.602,P=0.000);在肝癌临床分期较晚的癌组织AFP的表达强于分期较早者(X2=10.917,P=0.028;r=0.359,P=0.011);在肝癌病理分级低分化的癌组织AFP的表达强于高分化者(X2=14.462,P=0.003;r=0.461,P=0.001);AFP与VEGF在肝癌组织中的表达呈正相关;(r=0.419,P=0.003);同E-cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关。(r=-0.332 P=0.005)。AFP表达(-～+)及(++～+++)者累积生存率分别为78.6％和8.7％,平均生存时间分别为18.73月和9.21月。AFP表达越强,生存率越低,平均生存时间越短,预后越差(X2=15.772,P=0.000)。
　　 5 CD34在各组肝组织均有表达,表现为细胞浆及细胞膜黄染。CD34在癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组织(Z=-3.708P=0.000和Z=-2.931,P=0.003),癌旁硬化肝组织表达和正常组织表达无统计学差异。CD34在肝癌组织的表达与性别、年龄、AFP、HBeAb阴阳性、乙肝有无无关;在伴有门脉瘤栓或肝内转移的肝癌组织中表达强于不伴有肝内转移或门脉瘤栓者(Z=-2.633,P=0.008;r=0.376,P=0.007);在肝癌临床分期较晚的癌组织CD34的表达强于分期较早者(X2=12.005,P=0.017;r=0.452,P=0.001);在肝癌病理分级低分化的癌组织CD34的表达强于高分化者(X2=8.487,P=0.014;r=0.286,P=0.042);CD34与VEGF在肝癌组织中的表达呈正相关;(r=0.356,P=0.007);与E-Cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关。(r=-0.541,P=0.000)。CD34表达(-～+)及(++～+++)者累积生存率分别为63.2％和5.6％,平均生存时间分别为17.16月和8.42月。CD34表达越强,生存率越低,平均生存时间越短,预后越差(X2=14.177,P=0.000)。
　　 6 VEGF在各组肝组织均有表达,表现为细胞浆及细胞膜黄染。VEGF在癌组织的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组织(Z=-5.494P=0.000和Z=-3.959,P=0.000),癌旁硬化肝组织表达和正常组织表达无统计学差异。VEGF在肝癌组织的表达与性别、年龄、AFP、HBeAb阴阳性、乙肝有无无关;在伴有门脉瘤栓或肝内转移的肝癌组织中VEGF表达强于不伴有门脉瘤栓或肝内转移者(Z=-3.166,P=0.002;r=0.452,P=0.001);在肝癌临床分期较晚的癌组织VEGF的表达强于分期较早者(X2=11.880,P=0.018;r=0.383,P=0.006);在肝癌病理分级低分化的癌组织VEGF的表达强于高分化者(X2=10.196,P=0.006;r=0.455,P=0.001);VEGF表达(-～+)及(++～+++)者累积生存率分别为57.9％和11.0％,平均生存时间分别为16.05月和6.27月。VEGF表达越强,生存率越低,平均生存时间越短,预后越差(X2=24.31,P=0.000)。
　　 7 E-Cadherin在各组肝组织均有表达,表现为细胞膜及少数细胞浆黄染。E-Cadherin在癌组织的表达显著低于癌旁硬化肝组织和正常肝组织(Z=-5.210 P=0.000和Z=-4.832,P=0.000),癌旁硬化肝组织表达和正常组织表达无统计学差异。E-Cadherin在肝癌组织的表达与性别、年龄、AFP、门脉瘤栓或肝内转移、HBeAb阴阳性、乙肝有无无关;在肝癌临床分期较早的癌组织E-Cadherin的表达强于分期较晚者(X2=12.318,P=0.015;r=-0.471,P=0.001);在肝癌病理分级高分化的癌组织E-cad的表达强于低分化者(X2=16.361,P=0.000;r=-0.551,P=0.000);E-Cadherin表达(-～+)及(++～+++)者累积生存率分别为23.3％和85.70％,E-Cadherin表达越强,生存率越高,平均生存时间越长,预后越好(X2=7.964,P=0.005)。
　　 结论:1临床分期、病理分级及.AFP对肝细胞癌患者的预后的影响有显著性差异,临床分期较早、病理分化较好、AFP较低者,生存率较高,生存期较长,预后较好;反之,生存率较低,生存期较短,预后较差。
　　 2 Thy-1、CD34、CK7、AFP在肝癌组织中的表达显著升高,伴有癌栓、分化较差、属临床分期较晚期者Thy-1、CD34、CK7、AFP阳性表达较强,预后较差,生存期较短。
　　 3 VEGF在肝癌组织中的表达显著升高;在肝癌病理分级为低分化的癌组织中VEGF的表达较强,预后较差,生存时间短;E-cadherin在肝癌组织中的表达显著下调,在肝癌病理分级为低分化、临床分期较晚的癌组织中E-cadherin的表达下调或缺失,预后较差,生存时间较短。
　　 4肝癌组织中Thy-1、CD34、CK7、AFP与VEGF的表达两两之间均呈正相关,与E-cadherin的表达均呈负相关。提示肝癌干细胞在肝癌的发生、发展尤其是肝癌的复发与转移中起着极其重要的作用,有望成为肝癌治疗及评估预后的靶点。

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