化脓性链球菌表面蛋白Fba的免疫原性研究

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目的： A族链球菌(GAS)是一类分布广泛的致病菌，能引起多种临床疾病，包括从喉或皮肤的浅表感染到高度侵袭及具有潜在致死的感染，甚至感染后严重的超敏反应肾小球肾炎、风湿性心脏病等。这些疾病都是由链球菌对呼吸道及皮肤的上皮细胞的黏附引起的。GAS可以通过其菌体表面蛋白与人血浆纤连蛋白(Fibronectin)结合，并以此为分子桥梁再与上皮细胞上的相关受体结合，介导细菌进入细胞，从而逃避宿主细胞对它的吞噬和杀伤<'[1]>。 Fba蛋白是一种新发现的表达于GAS表面的蛋白，它至少存在于18个血清型中，并具有结合FHL-1、FH和纤连蛋白的能力。研究表明，Fba蛋白有助于GAS的抗吞噬，与FHL-1结合后能促进GAS进入人体上皮细胞，是一种重要的毒力因子<'[2，3]>。鉴于此，本课题选取了Fba蛋白编码基因为研究对象，构建了Fba原核表达质粒和真核表达质粒，之后诱导原核质粒表达，通过Western blot和ELISA检测重组蛋白。并将真核表达质粒和纯化的重组Fba蛋白免疫小鼠，对它们所诱导的体液免疫和细胞免疫进行评估，以进一步对其免疫原性及Fba在抗GAS感染免疫中的作用进行分析，为进一步研制以其为基础的诊断试剂和疫苗提供依据。方法： 1 PCR方法扩增Fba基因，克隆至pMD18-T载体上进行测序，测序正确后，经BamHI、EcoRI和BamHI、XhoI双酶切后，将其分别克隆至原核表达质粒pGEX4T-2和真核表达质粒pcDNA3.1。 2 原核表达质粒通过IPTG诱导，获得了高效表达的蛋白包涵体，采用从SDS凝胶上电洗脱回收的方法进行纯化回收，Western-blot和ELISA鉴定表达的目的蛋白。 3 以该蛋白作为抗原包被酶联板检测GAS全菌免疫鼠血清，未免疫鼠血清，抗链

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作者
李彩虹;
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作者单位

河北医科大学;

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授予单位河北医科大学;
学科免疫学
授予学位硕士
导师姓名魏林;
年度 2007
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类免疫生物学;
关键词
A族链球菌; Fba蛋白; DNA疫苗; 免疫原性; 重组疫苗;

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