T7噬菌体展示人源抗体库筛选雌二醇ScFv抗体

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摘要

图表目录

英文缩略词表

1 引言

2 T7噬菌体尾蛋白P11的表达、纯化及鉴定

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 实验用菌株

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要仪器型号及厂家

2．1．5 主要试剂的配制

2．2 实验方法

2．2．1 重组克隆载体pMD18-T的构建与鉴定

2．2．2 重组表达载体PTIG-TRX-P11的构建与鉴定

2．2．3 P11蛋白的原核表达

2．2．4 P11蛋白纯化

2．2．5 多克隆抗体的制备

2．3 实验结果

2．3．1 pMD18-T-P11阳性克隆子验证

2．3．2 PTIG-TRX-P11阳性克隆子鉴定

2．3．3 PTIG-TRX-P11的诱导表达

2．3．4 重组P11蛋白的纯化

2．3．5 新西兰大白兔抗血清的效价

2．3．6 多克隆抗体的纯化及鉴定

2．4 讨论

2．4．1 表达载体的选择

2．4．2 重组蛋白纯化方法的选择

3 P11蛋白单克隆抗体的制备

3．1 材料

3．1．1 实验动物

3．1．2 主要试剂

3．1．3 主要仪器设备

3．1．4 主要试剂的配制

3．2 实验方法

3．2．1 P11蛋白抗原表面多肽的选择与合成

3．2．2 实验动物的准备

3．2．3 细胞融合及阳性杂交瘤细胞的筛选

3．2．3 P11蛋白单克隆抗体的大量制备、纯化及鉴定

3．3 实验结果

3．3．1 抗原表位多肽序列的设计、合成及鉴定

3．3．2 细胞融合及阳性杂交瘤细胞株的建立

3．3．3 P11蛋白单克隆抗体的亚类鉴定

3．3．4 P11蛋白单克隆抗体的纯化及鉴定

3．4 讨论

4 抗雌二醇单链抗体的筛选与表达

4．1 实验材料

4．1．1 主要试剂

4．1．2 主要仪器

4．1．3 主要试剂的配制

4．2 实验方法

4．2．1 T7噬菌体展示人源抗体库的扩增及多样性的鉴定

4．2．2 噬菌体展示人源抗体库固相筛选雌二醇单链抗体

4．2．3 单链抗体的表达及性质鉴定

4．2．4 单链抗体的纯化

4．3 实验结果

4．3．1 T7噬菌体人源抗体库的鉴定

4．3．2 抗雌二醇噬菌体的富集

4．3．3 特异性噬菌体的筛选

4．3．4 筛选后ScFv基因序列表达载体的构建、蛋白表达及鉴定

4．4 讨论

4．4．1 T7噬菌体库筛选雌二酵单链抗体筛选方式的选择

4．4．2 噬菌体ELISA筛选E2特异性单链抗体

5 结论

参考文献

综述 噬菌体展示抗体库技术的研究进展

个人简历

致谢