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脾酪氨酸激酶抑制剂R935788对小鼠血小板功能的影响

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摘要

英文缩略词

1 引言

2 对象与方法

2．1 研究对象

2．2 饲养环境

2．3 饲料配制

2．4 主要试剂和仪器

2．5 血液采集

2．6 样本处理

2．7 流式细胞仪检测

2．7．1 开机

2．7．2 参数设定及荧光补偿调节

2．7．3 血小板活化率检测

2．7．4 血小板计数

2．7．5 关机

2．8 统计分析

2．9 质量控制

3 结果

3．1 对照组可比性

3．2 总体概况

3．3 不同时间点用药前后差异

3．4 重复测量资料方差分析

4 讨论

4．1 缺血性脑卒中

4．2 Syk与血小板

4．3 Syk抑制剂

4．4 流式细胞术

4．5 局限性与展望

5 结论

参考文献

综述 脾酪氨酸激酶研究进展

附录A 小鼠编号及生长体重表

附录B 昆明小鼠相关资料

附录C R935788说明书

个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢

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摘要

研究背景:
　　 缺血性脑卒中己成为我国日益严重的公共卫生问题。本课题组之前通过分子流行病学研究发现:脾酪氨酸激酶(Spleentyrosinekinase，Syk)基因突变对汉族人群缺血性脑卒中发病有保护性作用。同时，国内外的多项研究也显示Syk与炎性反应、白细胞聚集和血小板活化等涉及血栓成形成的病理生理过程相关。我们试图通过动物实验研究不同剂量Syk抑制剂对小鼠血小板活化功能的影响，探讨Syk功能在血栓形成过程中的作用，明确其对缺血性脑卒中保护性作用的机制，为人群脑卒中防治工作提供新的思路。
　　 目的:
　　 评价Syk抑制剂R935788对小鼠血小板活化功能及血小板计数的影响;探讨Syk对血小板功能影响可能的机制;探讨R935788应用于缺血性脑卒中防治的可行性。
　　 对象与方法:
　　 对象:采用完全随机设计的实验方案，选用72只6周龄大小昆明种小白鼠，雌性与雄性各半。
　　 方法:随机分为高剂量组、低剂量组和对照组，每组雌性小鼠与雄性小鼠各12只。高剂量组为喂养R9357883.0mg/kg饲料组，低剂量组为喂养R9357881.0mg/kg饲料组，对照组为正常饲料组。分别于第3周、第5周、第7周和第9周动态采集小鼠血液，标记CD61、CD62P等单克隆抗体后通过流式细胞仪检测血小板活化率及血小板计数等指标。利用SPSS12.0软件进行数据管理和分析。采用完全随机设计资料方差分析、配对t检验和重复测量资料方差分析等统计方法。检验水准α=0.05。
　　 结果:
　　 完全随机设计资料方差检验结果显示，给药前三个处理组小鼠血小板活化率差异无统计学意义，整体、雄性和雌性P值分别为0.939、0.978和0.957;给药前血小板计数差异无统计学意义，整体、雄性和雌性P值分别为0.978、0.997和0.976，表明小鼠来源于同一总体，相互间具有均衡可比性。
　　 配对t检验结果表明，两种药物处理组自第5周起血小板活化率与基线值差异有统计学意义，高剂量组t=7.554，P＜0.001;低剂量组t=2.265，P=0.033，高剂量组统计学意义更加显著。高剂量组自第5周起血小板计数与基线值差异即出现统计学意义，t=4.677，P＜0.001;低剂量组自第7周起差异出现统计学意义，t=5.045，P＜0.001。
　　 重复测量资料方差分析表明，时间因素主效应及时间因素与剂量因素间交互效应对小鼠血小板活化率及血小板计数有影响，整体、雄性和雌性P值均＜0.001。剂量因素主效应仅对血小板活化率有影响，整体、雄性和雌性P值分别为＜0.001，0.031和0.020。
　　 结论:
　　 R935788能显著降低小鼠血小板活化率，并使小鼠血液中血小板计数降低，从而明显地抑制血小板活化功能;高剂量R935788对小鼠血小板活化的抑制作用比低剂量更为明显，低剂量组对雌性的抑制作用比雄性更为明显;时间因素与剂量因素间交互效应对R935788抑制血小板作用有影响;R935788具有应于人群缺血性脑卒中防治的可能性。

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