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引言
1国内外研究进展
1.1土壤微生物在农业生态系统中的作用
1.2土壤环境因素对土壤微生物多样性的影响
1.3微生物多样性的研究方法
2研究目的与意义
3实验方案
3.1研究内容
3.2技术路线
第一章适于多熟制土壤的高效DNA提取方法的筛选
1实验材料
1.1研究材料
1.2试剂
1.3仪器
2实验方法
2.1土壤中总DNA的不同提取方法
2.2不同方法所得粗提DNA质量与纯度的检测
2.3粗提DNA的纯化
2.4不同提取方法对后期实验适用性分析
3结果
3.1三种方法提取的DNA溶液在不同波长下的吸光值
3.2三种方法所获得基因组DNA的电泳检测
3.3纯化后DNA的电泳检测
3.4不同方法提取的DNA扩增效果检测
4讨论
第二章GC夹引物PCR扩增方法的优化
1实验材料
2实验方法
2.1不同扩增策略的比较
2.2产物的琼脂糖电泳检测
3结果
3.1常规PCR的扩增结果
3.2降落式PCR(Touchdown PCR)的扩增结果
4讨论
第三章小麦不同生育期细菌群落多样性的DGGE电泳分析
1实验材料
2实验方法
2.1小麦时期V3区的PCR扩增
2.2 DGGE分离胶的制备
2.3 V3区的DGGE分离
2.4染色
3结果
3.1小麦时期PCR产物的琼脂糖电泳检测
3.2小麦时期V3区的DGGE分析
3.3小麦时期不同样品间的聚类分析
4讨论
第四章玉米不同生育期细菌群落多样性的DGGE电泳分析
1实验材料
2实验方法
3结果
3.1玉米时期PCR产物的琼脂糖电泳检测
3.2玉米时期V3区的DGGE分析
3.3玉米时期不同样品间的聚类分析
4讨论
第五章全文结论
5.1筛选出一种适用于多熟制土壤的高效DNA提取方法
5.2优化了含有“GC夹板”结构引物的PCR扩增方法
5.3小麦不同生育期及不同土层深度细菌的变化规律
5.4玉米不同生育期及不同土层深度细菌的变化规律
5.5冬小麦-春玉米整个农作过程中细菌的变化规律
参考文献
在读期间发表的论文
致谢
