霍乱弧菌O139和E1 Tor型菌株16s rDNA及16s～23s rDNA间隔区序列研究

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1993年在中国的新疆省柯坪县首次出现了O139群霍乱弧菌引起的霍乱爆发.该实验用16s rDNA指纹图谱、16s rDNA克隆子质粒图谱、16s rDNA及16s~23s rDNA间隔区序列分析法对来自新疆的O139群霍乱弧菌(XJ93006)、El Tor型霍乱弧菌(XJ89079)及印度分离的O139群霍乱弧菌(国际标准株MO45)进行研究,分析三者之间的遗传关系,探讨中国新疆省O139霍乱弧菌的来源,为霍乱的防治措施提供依据.结论1.PCR掺入法制备16s rDNA及VC0309探针,方法简便,探针产量高,无需提纯,可直接用于杂交.2.应用16s rDNA指纹图谱的方法比较菌株之间的差异,重复性好,分辨力高.三株霍乱弧菌的指纹图谱具有很大的相似性,说明O139菌与El Tor菌有紧密的遗传关系.但是三者之间又存在差异,提示遗传和环境因素在O139霍乱弧菌的演化中都有可能起到一定作用.3.该研究以多拷贝基因的上游序列为探针可以锁定出某一拷贝的位置,从而把这一拷贝克隆出来,进行专门分析,这种方法避免了多拷贝之间互相影响的问题.三株霍乱弧菌阳性克隆子pN16s23s45、pN16s23s79、pN16s23s06的质粒图谱在所选中的酶切位点上未见明显差异,表明所选的外源片段在三株霍乱弧菌中是相当保守的,三株霍乱弧菌具有紧密的遗传关系.通过测序比较三者序列上的差异可以更精细的分析三者之间的遗传关系.4.该研究以含有第三个拷贝16s rDNA、16s~23s rDNA间隔区的阳性克隆pN16s23s45、pN16s23s79、pN16s23s06作为模板可以单一的扩增出第三个拷贝16s rDNA及16s~23s rDNA间隔区序列,这种方法增强了三者的可比性,便于结果的分析.5.三株霍乱弧菌16s rDNA基因和16s~23s rDNA间隔区序列同源性比较显示XJ93006株与MO45株的亲缘关系近于XJ93006株与XJ89079株.提示中国新疆的XJ93006菌株与国外的MO45菌株具有更紧密的遗传关系.6.霍乱弧菌的演变与菌株之间的基因传递及环境因素都可能存在关系,深刻探讨O139霍乱弧菌的来源可以揭示霍乱弧菌乃至整个细菌界的遗传变异规律,为传染病的防治提供新的方向.

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作者
吕涛;
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作者单位

郑州大学;

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授予单位郑州大学;
学科流行病与卫生统计学
授予学位硕士
导师姓名段广才;
年度 2004
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类弧菌;
关键词
霍乱弧菌; 16s rDNA指纹图谱; 16s~23s rDNA间隔区; 基因探针; 质粒图谱;

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