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山里红叶酚类活性成分PHLC高效检测分离及其抗氧化活性研究

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目录

1 绪论

1.1 山里红概述

1.1.1 山里红的形态特征

1.1.2 山里红的分布

1.2 山里红的药理作用

1.2.1 抗氧化作用

1.2.2 对心脑血管的作用

1.2.3 降血脂作用

1.2.4 降血压作用

1.2.5 促进胃肠消化作用

1.2.6 抗肿瘤作用

1.2.7 抗菌作用

1.2.8保肝护肝作用

1.3山里红叶中主要化学成分研究

1.3.1黄酮类化合物

1.3.2酚酸类

1.3.3有机酸类

1.3.4三萜类

1.3.5其他成分

1.4山里红叶中主要酚类化合物

1.4.1主要成分

1.4.2酚类化合物的检测方法

1.5提取方法研究

1.5.1浸渍提取

1.5.2热回流提取

1.5.3超声辅助提取

1.6抗氧化活性研究概述

1.6.1抗氧化对机体的作用

1.6.2常用抗氧化测定方法

1.7研究的目的和意义

2山里红叶中七种酚类化合物HPLC检测方法的建立

2.1 实验部分

2.1.1实验仪器与试剂

2.1.2山里红叶材料处理及超声辅助提取工艺

2.1.3山里红叶中七种酚类化合物高效液相色谱检测法的建立

2.1.4溶液制备

2.1.5方法学验证

2.2结果与讨论

2.2.1高效液相色谱法的建立

2.2.2液相检测方法学验证

2.3本章小结

3山里红叶中酚类化合物提取方法优化

3.1实验部分

3.1.1实验仪器和试剂

3.1.2超声提取方法

3.1.3单因素试验

3.1.4实验设计

3.1.5统计分析

3.2结果与讨论

3.2.1单因素优化

3.2.2 BBD设计优化主要影响因素水平

3.2.3模型拟合

3.2.4 BBD相应面分析

3.2.5验证预测模型

3.3本章小结

4山里红叶中酚类化合物抗氧化活性研究

4.1实验部分

4.2实验方法

4.2.1山里红叶不同提取方法

4.2.2抗氧化活性实验

4.3结果与讨论

4.3.1不同提取方法对七种酚类成分的含量影响

4.3.2山里红叶的体外抗氧化活性

4.4本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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摘要

山里红(Crataegus pinnatifida Bge. var. major N. E. Br.)为蔷薇科山楂属植物,富含多种酚类活性成分。其叶片中多种酚类活性成分均具有抗氧化活性。目前,对于采用HPLC同时测定山里红叶中多种酚类化合物及抗氧化活性的研究未见报道。本文研究山里红叶中酚类化合物的高效分离及抗氧化活性并建立同时测定山里红叶中绿原酸(CA),牡荆素-4″-O-葡萄糖苷(VG),牡荆素-2″-O-鼠李糖苷(VR),荭草苷(ORT),芦丁(RT),牡荆素(VIT)和金丝桃苷(HYP)的方法。在单因素实验基础上,应用响应面法(RSM)中的Box-Behnken(BBD)进行实验设计,对超声辅助提取(UAE)条件进行优化。对比超声辅助提取法、浸渍提取法和热回流提取法对酚类化合物含量的影响。通过对提取物的DPPH自由基清除能力,ABTS自由基清除能力和还原能力实验评价其抗氧化活性。
  本研究主要内容包括:⑴建立HPLC法检测样品中的酚类化合物,在检测波长350 nm处,32 min内,同时测定7种酚类化合物含量。在此系统下,绿原酸、牡荆素-4″-O-葡萄糖苷、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷、荭草苷、芦丁、牡荆素和金丝桃苷保留时间分别为8.82 min、10.69 min、14.88 min、18.59 min、21.16 min、23.89 min和31.55 min。该方法具有较好的分离度,七种酚类化合物的线性关系、定量限和检测限、精确度、重现性、稳定性和回收率良好。方法学验证结果可靠准确,可用于绿原酸、牡荆素-4″-O-葡萄糖苷、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷、荭草苷、芦丁、牡荆素和金丝桃苷七种成分的定性定量分析。⑵通过对超声辅助提取法中的影响因素进行单因素分析,获得单因素最佳条件为料液比1:15、温度40℃、乙醇浓度40%和时间25 min。在最优条件下,酚类化合物的提取率分别可达到5.73 mg/g、6.20 mg/g、6.28 mg/g和6.34 mg/g。通过单因素实验和响应面分析中Box-Behnken实验设计,在最佳提取条件下(温度41℃,时间31 min,料液比1:15,乙醇浓度39%),提取物中CA、VG、VR、ORT、RT、VIT和HYP的含量分别为0.46 mg/g、0.38 mg/g、4.37 mg/g、0.033 mg/g、0.036 mg/g、0.30 mg/g和1.19mg/g。⑶采用超声辅助提取法、浸渍提取法和热回流提取法对山里红叶中七种酚类化合物含量进行考察。结果显示,使用超声辅助提取法提取七种酚类化合物的提取效率更高为6.017 mg/g,浸渍提取为4.862 mg/g和热回流提取3.938 mg/g。因此,相比传统的浸渍提取和热回流提取,超声辅助提取法更适用于山里红叶中酚类化合物的含量提取研究。⑷实验采用DPPH法、ABTS法、铁离子还原能力法对不同提取方法获得的山里红叶提取物进行抗氧化活性评价。提取物的DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和铁离子还原能力被分别确定为0.69 mg/mL(IC50值)、0.86 mmoL/g和0.24 mg/mL(IC50值)。结果表明,三种制备方法得到的山里红叶提取物均具有一定的抗氧化活性,但超声辅助提取法获得的提取物抗氧化活性更好,其可以作为开发成本低廉的天然抗氧化剂研究的重点。

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